第二章蛋白质化学技巧.ppt

第二章 蛋白质化学 第二章 蛋白质化学 学习要求 1. 了解蛋白质的分类和生物功能。 2. 了解氨基酸分类、结构、重要化学反应，重点弄清楚它的两性性质, pI 。 3. 弄清楚蛋白质的一级结构及其序列分析方法。了解二、三和四级结构基本概念。 4. 了解蛋白质的重要理化性质。 5. 了解蛋白质分离、纯化方法及其理论依据。 6. 有那些结合蛋白？它们的分布、特性和生物功能。 2.1 概述——蛋白质组成 组成基本单位 主要组成元素为碳、氢、氧、氮 有的还含有硫、磷、碘或金属元素（如铁、铜、锌等） N的含量：16% 2.1 概述——蛋白质的常见分类方法 1．根据蛋白质的化学组成 2．根据蛋白质的溶解性和组成 3．根据蛋白质分子形状 4．根据蛋白质生物功能 2.1 概述——蛋白质的重要作用 蛋白质作为生命现象的物质基础之一，构成一切细胞和组织结构的最重要的组成成分，参与生物体内许多方面的重要功能。 2.1 概述——蛋白质的重要作用 （一）酶的催化作用 （二）调节功能：胰岛素 （三）结构支持作用：胶原蛋白 （四）运输功能：血红蛋白 （五）免疫功能：抗体 （六）运动功能：肌动蛋白，肌球蛋白 （七）储藏功能：脂类与血浆蛋白结合 （八）生物膜功能 2.2 氨基酸 蛋白质的水解 ——产生氨基酸的基本手段 氨基酸的结构与分类 氨基酸的理化性质 2.2.1 蛋白质的水解——产生氨基酸的基本手段 酸水解 ——HCl; H2SO4 碱水解 ——NaOH; Ba(OH)2 蛋白酶 2.2.2 氨基酸的结构与分类 蛋白质是由20种基本氨基酸组成的。 2.2.2 氨基酸的结构与分类 α-氨基酸有两种构型：D构型和L构型 它们是与甘油醛或乳酸相比较而决定的。凡是与L－甘油醛（或L－乳酸）构型相同的，就定义为L－氨基酸，反之为D－氨基酸。 2.2.2 氨基酸的结构与分类 2.2.2 氨基酸的结构与分类 2.2.2 氨基酸的结构与分类 根据酸碱性质 根据R基的化学结构 根据R基的极性 2.2.2 氨基酸的结构与分类——根据酸碱性质 酸性氨基酸 碱性氨基酸 中性氨基酸 2.2.2 氨基酸的结构与分类——根据R基的结构 芳香族氨基酸 杂环氨基酸 杂环亚氨基酸 脂肪族氨基酸 2.2.2 氨基酸的结构与分类——根据R基的极性 2.2.2 氨基酸的结构与分类——稀有氨基酸(非编码氨基酸) 稀有氨基酸(非编码氨基酸)属于氨基酸的衍生物，也称为修饰氨基酸。 如：胱氨酸、羟赖氨酸、羟脯氨酸、L-甲状腺素等。 2.2.2 氨基酸的结构与分类——稀有氨基酸 2.2.2 氨基酸的结构与分类——稀有氨基酸 不是蛋白质的组成成分； 以游离或结合的形式存在于生物界； 大都是常见氨基酸的衍生物； 还有些是β-,γ-,δ-, 和D-型氨基酸。 2.2.3 氨基酸的理化性质 一般物理性质 氨基酸的酸碱性质 氨基酸的光吸收性 氨基酸的化学反应 2.2.3 氨基酸的理化性质——一般物理性质 α-氨基酸为无色晶体，不同氨基酸其晶体形状不相同； 氨基酸熔点一般在200—300°C； 氨基酸的溶解度； 各种氨基酸有不同的味感：谷氨酸钠； 氨基酸的比旋光度。 2.2.3 氨基酸的理化性质——氨基酸的酸碱性质 氨基酸在水溶液中或在晶体状态时主要是以两性离子的形式存在。 2.2.3 氨基酸的理化性质——氨基酸的酸碱性质 重要概念：氨基酸的等电点 pI 2.2.3 氨基酸的理化性质——氨基酸的酸碱性质 以谷氨酸为例： pI=1/2(pK1+pKR)＝1/2(2.19+4.25)=3.22 2.2.3 氨基酸的理化性质——氨基酸的酸碱性质 小结： 在等电点以上的任何pH，氨基酸带净负电荷，在电场中将向正极移动； 在低于等电点的任何pH，氨基酸带净正电荷，在电场中将向负极移动; 在一定pH范围内，氨基酸溶液的pH离等电点愈远，氨基酸所携带的净电荷愈大。 2.2.3 氨基酸的理化性质——氨基酸的光吸收性 芳香族侧链有紫外吸收，所以测定280nm处的吸收，是定量蛋白质浓度最常用的方法。 2.2.3 氨基酸的理化性质——氨基酸的光吸收性 2.2.3 氨基酸的理化性质——氨基酸的化学反应 α-氨基参与 α-羧基参与 α-氨基和α-羧基共同参与 侧链R基参与 2.2.3 氨基酸的理化性质——氨基酸的化学反应 α-氨基参与——(1)与亚硝酸反应 2.2.3 氨基酸的理化性质——氨基酸的化学反应 α-氨基参与——(2)与甲醛反应 2.2.3 氨基酸的理化性质——氨基酸的化学反应 α-氨基参与——(3)与2,4-二硝基氟苯反应 2.2.3 氨基酸的理化性质——氨基酸的化学反应 α-氨基参与——(4)酰化反应 2.2.3