植物组织培养技术第七章植物脱毒快繁技术.pptVIP

病毒的危害给植物生产带来的损失很大，如草莓病毒的危害，使草莓产量严重降低，品质大大退化。葡萄扇叶病毒使葡萄减产10％~18％，花卉病毒的危害一般会影响花卉的观赏价值，其表现是花少而小，产生畸形、变色等。 由于病毒对植物造成如此严童的危害，所以世界各国都积极开始重视这方面的研究。 无病毒植株培育的意义 1. 去除病毒危害，提高作物品质与产量。采用生物、物理、化学等途径防治病毒病收效甚微，甚至毫无成效。而通过组织培养的方法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类，提高产量、质量。因此，到60至70年代在花卉、蔬菜和果树等得到广泛的应用。 2. 减少环境污染，有利于保护环境 栽培去病毒植物可减少药剂的使用。 1、热处理脱毒原理： ①病毒是DNA大分子，病毒进入植物细胞后，随植物细胞DNA一起复制。热处理并不能杀死细胞，只是钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去病毒的侵染能力。 ②热处理是一种物理效应，可加速植物细胞分裂，在激烈分裂的细胞中正常核蛋白合成占优势，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。因此加速分生组织细胞的分裂，能够获得无病毒植株。 （1）. 温汤浸渍处理 适用：休眠器官、剪下的接穗或种植的材料 方法：50℃左右的温水中浸渍10min至数小时 特点：方法简便易行，但易使材料受伤。 （2.） 热空气处理 适用：对活跃生长的茎尖效果较好 方法：将生长的盆栽植株移人温热治疗室(箱)内，一般在35~40℃下处理几十分钟至数月。处理时间因植物而异，如香石竹于38℃下处理两个月，其茎尖所含病毒即可被清除。马铃薯在35℃下处理几个月才能获得无病毒苗。 特点：热处理方法主要缺陷是并非能脱除所有病毒。例如在马铃薯中，应用这项技术只能消除卷叶病毒。因此热处理需与其他方法配合应用，才可获得良好的脱毒效果 。 理由：①病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度；② 有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。 缺点：植株遗传性不稳定，可能会产生变异植株 （二）茎尖微体嫁接 概念：将无病毒茎尖（ 0.4~1.0mm ）嫁接在培养基上培养的实生砧木上，以获得脱毒苗木的技术。 适宜：茎尖培养难以生根的植物，如桃、柑橘、苹果等 无病毒茎尖来源：成年无病毒植物、温室培养的植物、热处理植物和脱毒试管苗。 （三）化学疗法脱毒 许多化学药品(包括嘌呤、嘧啶类似物、氨基酸、抗菌素等)对离体组织和原生质体的培养具有脱毒效果。 常用的药品有：8-氮鸟嘌呤、2-硫脲嘧啶、杀稻瘟抗菌素、放线菌素D、庆大霉素等。 例如，将100ug2-硫脲嘧啶加入培养基可除去烟草愈伤组织中的PVY (马铃薯病毒)。 鉴定方法： 抗原的制备 →→抗血清的采收，分离→→把稀释的抗血清与未知的病毒植物的汁液在小试管内混合→→根据沉淀反应来鉴定病毒种类。 植物无病毒苗的培育 3. 特点： 特异性高（这种抗血清是高度专一性的试剂），测定速度快，一般几小时甚至几分钟就可以完成。所以抗血清法成为植物病毒鉴定中最有用的方法之一。 植物无病毒苗的培育 4、电子显微镜检查法 病毒有一定的形态（ 球状、杆状、线状等）和大小（ 0.01~0.3um ）。 采用电子显微镜（分辨率0.0001um）可以直接观察病毒，检查出有无病毒存在，并鉴定病毒的种类。 优点：灵敏度高，能在植物粗提取液中定量测定病毒。 （四）其它途径脱毒 1、愈伤组织培养脱毒 2、茎尖微体嫁接 3、化学疗法脱毒  1、愈伤组织培养脱毒?? 愈伤组织细胞带病原菌不均一，部分细胞不带病毒，由这些细胞再生的植株是无病毒的。多次继代的愈伤组织中病毒含量下降，甚至检测不出病毒。 愈伤组织的某些细胞不带病毒原因： 1、病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度； 2、有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。 愈伤组织脱毒的缺陷是植株遗传性不稳定，可能会产生变异植株。 三、脱毒快繁材料的选择 应注意以下几点： 1）品种要可靠 2）要选择经当地栽培确认的高产优质的品种来作 为脱毒材料 3）名贵的植物良种 4）植物生长旺盛期，再生率高，脱毒效果好 四、植物病毒的鉴定 1、外观判断法 2、指示植物法 3、抗血清鉴定法 4、电子显微镜检查法