第二章菌种的筛选、选育和保藏.ppt

第二章、菌种的筛选、 选育和保藏 菌种的筛选、选育和保藏 概述： 1、菌种的作用 是决定发酵产品是否具有产业化和商业化价值的关键因素。是发酵工业的灵魂。 2、工业用微生物的分类 可培养微生物：细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌（霉菌）。 未培育微生物：如极端微生物。 利用方式有：模拟自然培养法、宏基因组分析法。 模拟自然培养法 模拟微生物生长的自然环境对未培养微生物进行可培养研究。 宏基因组分析法 直接依据基因、基因组、蛋白质序列，以及调节表达机制构建高效表达的工程菌等途径进行开发利用。即不通过纯培养过程，而是直接在基因水平上开发。 菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种的分离、筛选 二、菌种获得的途径 1、从菌种保存机构直接购买 2、从自然界中筛选 3、在生产过程中发酵水平高的批号中重新进行分离筛选 三、分离筛选的步骤 定方案--样品采集--样品预处理--目的菌富集培养--菌种分离--菌种初筛--菌种复筛--菌种发酵性能鉴定 定方案 新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。 实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。 样品采集 1、采样对象 来源广，获得的可能性大。以采集土壤为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。极端环境 从自然界筛选 2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。 3、采土方式：在选好适当地点后，用小萨子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。 样品预处理（见书） 目的：提高菌种的分离效率 物理方法 化学方法 诱饵法 富集培养 目的：增加目标微生物数量 方法： 菌种分离 目的:经过富集的微生物虽然在数量上占优势,但是得到的培养物还是多种微生物的混合物,所以需要进行菌种的分离。 常用的分离方法有： 1、平板划线分离法 2、稀释分离法 3、简单平板分离法 4、涂布分离法 5、毛细管分离法 6、小滴分离法 菌种的初筛 分离得到的菌种，需要进一步筛选选择产物合成能力较高的菌株。生产性能的测定即通过初筛和复筛来确定。 初筛：从分离得到的大量微生物中将具有目的产物合成能力的微生物筛选出来的过程。 菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种的分离、筛选 方法：1、平板筛选 例：水解酶菌株在培养基中加入该酶的底物作为唯一的碳源或氮源，适温培养后根据水解圈和菌落的大小来判断产酶活力的大小。 2、摇瓶发酵筛选 接近发酵条件，易于扩大培养。 特点：简单快速，活性只能相对比较，不能得到确切的产量。 菌种的复筛 一般用摇瓶发酵培养，发酵液用精确的分析方法测定。 野生型菌株：直接从自然界样品中分离得到的具有一定生产性能的菌株。 复筛过程可以结合各种培养条件进行筛选，以便初步掌握适合野生型菌株的培养条件，为育种服务。 菌种的鉴定 程序为：测定一系列必要的鉴定指标------- 查找权威性的鉴定手册，确定菌种类型。 不同的微生物有不同的重点鉴定指标。 例如：真菌以形态指标为主要指标；放线菌、酵母菌以形态指标与生理指标兼用；细菌适宜生理、生化和遗传等指标。 鉴定微生物的技术可分成4个不同的水平： 1、细胞的形态和习性水平 2、细胞组分水平 3、蛋白质水平 4、基因或核酸水平 经典的分类鉴定方法： 1、形态学特征 2、生理、生化特征 3、血清学试验 4、氨基酸顺序和蛋白质分析 现代分类鉴定方法： 1、微生物遗传型的鉴定 2、细胞化学成分特征分类法 3、数值分类法 直接到权威机构鉴定 菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种的分离、筛选 菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种的分离、筛选 菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种的分离、筛选 菌种的筛选、选育和保藏 菌种的选育 菌种的筛选、选育和保藏 菌种的选育 菌种的筛选、选育和保藏 菌种的选育 造成变异的原因是有： 长期保藏，频繁的传代，菌体在代谢过程中产生具有诱变作用的物质，诱发DNA结构的改变。DNA中存在的增变基因也可能诱发自然突变等。 由