chapter3-2蛋白质重点分析.ppt

3.4 蛋白质 蛋白质是由一条或多条多肽(polypeptide) 链以特殊方式结合而成的生物大分子。 通常是将分子量在6000以上的多肽称为蛋白质。 蛋白质分子量变化范围很大, 从大约6000到1000 000，甚至更大。 3.4.1 蛋白质的分类和性质 1.蛋白质的分类 (1) 依据蛋白质的组成(composition)分类 简单蛋白(simple protein):只含由?-氨基酸组成的肽链，不含其它成分。 结合蛋白(conjugated protein):由简单蛋白与其它非蛋白成分结合而成。 结合蛋白 色蛋白：由简单蛋白与色素物质结合而成。如血红蛋白、叶绿蛋白和细胞色素等。 糖蛋白：由简单蛋白与糖类物质组成。如细胞膜中的糖蛋白等。 脂蛋白：由简单蛋白与脂类结合而成。 如血清?-，?-脂蛋白等。 核蛋白：由简单蛋白与核酸结合而成。如细胞核中的核糖核蛋白等。 (2)依据蛋白质的外形(shape)分类 球状蛋白(globular proteins): 外形接近球形或椭圆形，溶解性好，能形成结晶。如：免疫球蛋白、血红蛋白等。 纤维状蛋白(fibrous proteins)：分子类似纤维或细棒。又分为可溶性纤维蛋白质和不溶性纤维状蛋白质。如：a-角蛋白、丝心蛋白等。 2.蛋白质的性质 具有多肽的一切性质。此外，蛋白质还具有一些特殊的性质： 蛋白质的两性解离和电泳现象 蛋白质的胶体性质 蛋白质的沉淀作用 蛋白质的变性 蛋白质的紫外吸收 蛋白质的两性解离：蛋白质与多肽一样，能够发生两性解离，也有等电点。在等电点时，蛋白质的溶解度最小，在电场中不移动。 蛋白质电泳现象：在pH大于等电点溶液中，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向正极移动；在pH小于等电点溶液中，蛋白质粒子带正电荷，在电场中向负极移动。这种现象称为蛋白质电泳(Electrophoresis)。 由于蛋白质的分子量很大，它在水中能够形成胶体溶液。蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质，如丁达尔现象、布郎运动等。 由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。 蛋白质胶体溶液的稳定性与它的分子量大小、所带的电荷和水化作用有关。 改变溶液的条件，将影响蛋白质的溶解性质。 在适当的条件下，蛋白质能够从溶液中沉淀出来。 在温和条件下，通过改变溶液的pH或电荷状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分离。 在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀。 可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等。 在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水。 由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。 如加热沉淀、强酸碱沉淀、重金属盐沉淀和生物碱沉淀等都属于不可逆沉淀。 抗体和抗原蛋白通过相互识别和结合而发生的沉淀现象。是生物体免疫功能的基础。 某些物理或化学因素，能够破坏蛋白质的结构状态，引起蛋白质理化性质改变并导致其生理活性丧失。这种现象称为蛋白质的变性(denaturation)。 蛋白质的变性 变性蛋白质通常都是固体状态物质，不溶于水和其它溶剂，也不可能恢复原有蛋白质所具有的性质。所以，蛋白质的变性通常都伴随着不可逆沉淀。引起变性的主要因素是热、紫外光、激烈的搅拌以及强酸和强碱等。 大部分蛋白质均含有带芳香环的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。 这三种氨基酸的在280nm 附近有最大吸收。因此，大多数蛋白质在280nm 附近显示强的吸收。 利用这个性质，可以对蛋白质进行定性鉴定。 3.4.2 蛋白质的分离和纯化 所有的分离和纯化过程都必须在温和的条件下进行。 1. 蛋白质的分离 粗品的制备过程： 3. 蛋白质分离纯化的基本方法 （1）根据分子大小不同的分离方法 ? 透析法：利用蛋白质分子不能透过半透膜，使它与其它小分子化合物，如无机盐、单糖、双糖、氨基酸、小肽以及表面活性剂等分离。 半透膜：玻璃纸或高分子合成材料。 ? 离心沉降法-最常用的蛋白质分离方法 原理：蛋白质溶液在离心机的离心管内进行离心时，在强离心力作用下，蛋白质分子会发生沉降，并与溶液分离。沉降速率取决于离心机转子的速度以及蛋白质颗粒的大小、密度、分子的形状、溶液的密度和性质等。通过控制不同的离心速度，达到分离蛋白质的目的。 方法：先加入适当 的沉淀剂（如中性饱和硫酸铵溶液、酸、碱等），将蛋白质溶液转变成悬浮液，在不同的离心速度下，使不同大小和密度的蛋白质颗粒分离。 ? 凝胶色谱法(Gel filtration column) 介质：交联葡萄糖、琼脂糖或聚丙烯酰胺形成的凝胶颗粒。凝胶颗粒的内部是多孔的