基因编辑技术2015.12.8.x试题.pptxVIP

Clustered Regularly Interspaced Short Palind romic Repeats ——ZFN、TALEN、CRISPR/Cas 2017-4-5 Biomics CRISPR team：陈志飞 闫沛涵 孟彤 余学森 王强 （非笔画顺序） 定义及背景 机理简述 三大编辑技术 CRISPR/Cas优势 CRISPR/Cas应用 contents 定义及背景 什么是CRISPRs？ CRISPRs 全称为规律成簇间隔短回文重复。这是一类广泛分布于细菌和古菌基因组中的重复结构。 Your text here 这种基因组编辑技术能够重编程一种CRISPR系统，其有潜力切割任何的特异性DNA靶标。 背景 1. 怀特海德生物医学研究所的创始人 曾在1974年成功构建出第一只转基因小鼠，由此改变了遗传学的研究模式。 2. 1987年，日本大阪大学的研究人员在调查一种编码碱性磷酸酶的细菌基因序列时，发现了邻近的一个不同寻常的DNA片段。 机 理 核酸内切酶在特定位点的DNA进行切割，形成双链DNA缺口，然后细胞会借助同源重组机制或者非同源末端连接机制对断裂的DNA进行修复。近几十年来全基因组测序常规化，在很多的细菌和古细菌中发现了包含CRISPR序列的区域和CRISPR相关(Cas)基因。发现这些短独特序列能与病毒或质粒DNA序列相匹配，表明CRISPR–Cas系统能够编码“适应性”免疫系统。它具有普适应。 重要技术 ZFN (Zinc-finger nucleases, ZFN) CRISPR/Cas (clustered regulatory interspaced short palindromic repeat /Cas-based RNA-guided DNA endonucleases） Your text here TALEN （transcription activator-like effector nucleases) 三大利器 ZFN原理 ZFN=DNA识别域+核酸内切酶 DNA识别域： 由一系列 Cys2-His2锌指蛋白（zinc-fingers）串联组成（一般3~4个），每个锌指蛋白识别并结合一个特异的三联体碱基。 核酸内切酶： 非特异性核酸内切酶FokI，形成二聚体时切割双链DNA。 TALEN TALE（Transcription activator -like effectors）:一种源于植物致病菌的靶向基因操作技术。 科学家发现，来自植物细菌Xanthomonas sp.的TAL蛋白的核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有恒定的对应关系,一个模块单元识别一个碱基，简单且特异性极好。 通过组合各类模块，可对任意核苷酸序列进行靶向特异性敲除或内源基因的表达调控。 目前已在人、大鼠、小鼠、猪、羊、斑马鱼、拟南芥及酵母等多类物种中得到成功应用。 TALEN原理 TALEN=DNA识别域+核酸内切酶 DNA识别域：由一系列TAL蛋白串联组成（一般20个左右）， 每个TAL蛋白识别并结合一个对应的碱基。 核酸内切酶： 非特异性核酸内切酶FokI， 形成二聚体时切割双链DNA 9 全长为34aa的Tal 蛋白的第12、13位氨基残基可以特异性识别核苷酸碱基。 NG可以识别T HD可以识别C NI可以识别A NN可以识别G或A 通过这种特异性识别，将多个Tal蛋白组装在一起，再加上Fok I核酸内切酶，就可以构成可以识别目的片段的Tale蛋白。 10 Add Your Title CRISPR序列： 细菌和古细菌中发现的很多成簇的、规律间隔的短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeat sequences）。 Cas：CRISPR相关基因（CRISPR-associated genes） CRISPR-Cas系统是细菌的免疫系统： CRISPR序列能特异性识别外源核酸序列；Cas蛋白的非特异性核酸内切酶功能将外源核酸切断。 11 CRISPR/Cas系统 CRISPR-Cas9=DNA识别域+核酸内切酶 DNA识别域：向导RNA 核酸内切酶： Cas9核酸内切酶 向导RNA由两部分组成：CRISPR RNA (c