吉菲源.ppt

吉菲源 新一代EGFR突变鉴定技术 一、EGFR介绍 1.1、EGFR概述 表皮生长因子受体（EGFR）是原癌基因HER-1的表达产物，可分为胞外区、跨膜区和胞内区三个部分。 胞外区由621个氨基酸构成，是配体结合区，对EGFR配体具有高度亲和力； 跨膜区由23个氨基酸残基构成螺旋状结构的疏水区，将受体固定在细胞膜上； 胞内区由542个氨基酸构成,有典型的ATP结合位点和酪氨酸激酶区，其酪氨酸激酶活性在调节细胞的增殖分化中起重要作用。 1.2 EGFR信号通路 1.3 EGFR mutations Most common EGFR mutations Tyrosine kinase sensitive and resistant somatic mutations of EGFR in NSCLC EGFR靶向药物（以EGFR信号通路为靶点） EGFR 与TKI的关系 EGFR 与TKI的关系 IPASS研究 西班牙研究 Response to TKI monotherapy according to s-EGFR-m TKI response characteristics of EGFR Exon 20 EGFR-TKI对EGFR高突变患者的疗效明显高于EGFR低突变的患者。 由此可见，EGFR突变情况是EGFR-TKI疗效的强预测因素。 此处加上NCCN指南 影响肿瘤个体化检测结果的主要因素 EGFR检测方法对比 三、吉菲源—新一代EGFR突变鉴定技术 新一代EGFR突变鉴定技术——ARMS+测序 全面覆盖EGFR 31种突变类型 精准区分19号外显子所有突变类型 区分EGFR突变丰度，预测EGFR-TKI疗效 高度的特异性、灵敏性和稳定性，确保检测结果的可靠性 新一代EGFR突变鉴定技术——ARMS+测序 ARMS法（扩增阻滞突变系统） 吉菲源全面覆盖EGFR 31种突变类型 吉菲源可精准区分19号外显子所有突变类型 不是所有的EGFR exon19突变都对TKIs敏感 吉菲源可区分EGFR突变丰度，预测EGFR-TKI疗效 吉菲源可区分EGFR突变丰度，预测EGFR-TKI疗效 高度的特异性、灵敏性和稳定性，确保检测结果的可靠性 1、吉菲源选用特异性的AMRs引物和改良的Taqman探针，确保试剂的高度特异性； 2、吉菲源可耐受1.5ug的野生型人类基因组DNA，无非特异；在低至5ng/ul的野生型基因组DNA背景下，对含1%EGFR基因突变的DNA样本均可检出；在低至50ng/ul的野生型基因组DNA背景下，对含10%EGFR exon19突变的DNA样本能准确分型； 3、对各精密度的参考品，在相应的反应液中重复做10次，均能检出，且实验数据CV值均小于10% 。 吉菲源检测EGFR突变操作流程 郑 军 上海源奇生物医药科技有限公司 * 安进公司Abgenix公司 单克隆抗体 作用于EGFR胞外区，抑制配体与受体的结合 帕尼单抗 维克替比 默克雪兰诺 单克隆抗体 作用于EGFR胞外区，抑制配体与受体的结合 爱必妥 西妥昔单抗 罗氏 TKI 作用与EGFR胞内区酪氨酸激酶区，抑制其活性 特罗凯 厄罗替尼 阿斯利康 TKI 作用与EGFR胞内区酪氨酸激酶区，抑制其活性 易瑞沙 吉非替尼 生产厂家 药物类型 作用机制 商品名 靶向药物 EGFR-TKI的疗效不仅与突变点有关，还与突变量有关 E20的点突变是继发性耐药的主要机制 并非所有EGFR突变患者都能从TKI治疗中获益 EGFR突变患者对EGFR-TKI敏感 遗传异质性 细胞异质性 肿瘤细胞与正常细胞混杂 荧光定量PCR仪 测序仪 仪器要求 低 高 数据分析要求 简单/快 复杂/慢 流程与速度 不可以，只能对设定位点进行检测 可以 能否检出新突变 高 低 FFPE标本成功率 高，1% 低，20%左右 敏感度 ARMS法 测序法 　 ARMS+测序 高度特异性和灵敏性， 能检测出含1%EGFR 突变的DNA样本 能检测出多种突变， 包括已知突变和未知 突变 能准确区分EGFR的 不同突变丰度 阳性E19产物进一步测序验证 病人石蜡标本 纯化基因组DNA Real-time PCR UNG 和real-time PCR 体系 显著降低污染的风险 标本是否存在EGFR突变，及突变的丰度 EGFR基因19号外显子突变类型 *