种子引发课题组实验步骤.doc

种子引发试验方案 （一）预试验 试验材料：郑单958 1、找到最佳引发时间 在垫有两层滤纸的中，每个均匀摆放50粒种子，加盖后用封口膜密封，在15下引发在垫有两层滤纸的中，每个均匀摆放50粒种子，加盖后用封口膜密封，在15下引发结束后，用蒸馏水将种子快速冲洗干净，滤纸吸干种子表面水分，种子放于室温下回干至原始含水量。将引发和对照种子依次摆放在垫有两层滤纸经灭菌后的培养皿中5℃下进行标准发芽试验，逐日记录种子根和芽的生长情况，判断在哪个浓度下生根发芽长势最好即为最佳浓度C。(实验结果见表1) 3、加速老化试验 a 样品准备：在测定老化处理之前，如果不知道带测定种子批的水分，应采用标准水分测定法检查种子批的水分。对于水分低于10%或高于14%的种子批，应在加速老化测定前将种子批的水分调节至10%-14%然后将不同种子批的水分在相同温度和湿度条件下预先平衡含水量。 b 选取3个使用过的老化盒、盖和网架经过热消毒或用15%次氯酸钠溶液浸洗（我们用的是0.1% Hgl2）并烘干，将适量蒸馏水40m加入老化内箱中，放上网架，确信水不会渗到网架和将要放置的种子上。称取40g玉米种子放在网架上，摊平成一层，以保证每粒种子均匀吸湿，再加上盖子（不用密封）。老化外箱设置温度45。将老化盒放入老化箱，老化72h。取出后立即进行称重，自然条件下风干两天，使含水量降低至13%，再做发芽。将，。（实验结果见表2） 玉米种子加速老化试验条件 内箱 外箱 老化后种子水分 种子重量（g) 箱数目 老化温度 老化时间（h) 40.0 2 45 72 26-29 热水浴老化法：一定量的种子放入到小网袋内，将装有种子的网袋放入到58±1的水浴锅中，60min后取出晾于室温，风干到自然含水量。 （二）正式试验 试验材料：郑单958 1 种子处理在垫有两层滤纸的中，每个均匀摆放50粒种子，加盖后用封口膜密封，在15引发结束后，用蒸馏水将种子快速冲洗，滤纸吸干种子表面水分，种子放于室温下回干至原始含水量。2 种子干旱胁迫下吸胀发芽 选取籽粒饱满、均匀度一致的郑单958玉米种子进行培养，未进行引发处理的种子作对照，种子使用0.1% HgCl2消毒15 min，并用蒸馏水冲洗干净将引发和对照种子依次摆放在垫有两层滤纸经灭菌后的培养皿中培养皿5℃下吸胀萌发7天，逐日记录种子根和芽的生长情况，统计发芽率，发芽势并计算发芽指数、平均发芽日数和活力指数。 3 种子吸胀期间生理生化指标测定 将引发和种子依次摆放在垫有两层滤纸经灭菌后的培养皿中培养皿培养皿一、目的要求 马斯亮蓝G-250染马斯亮蓝G-250法马斯亮蓝G-250是一种，游离状态下呈棕褐色，与蛋白质结合后变成色蛋白质含量0～1000μg·物在595nm下的马斯亮蓝G-250μg)级蛋白质含量，是一种常用的蛋白质快速微量测定法。其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低，且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定的差异。 三、材料与用具1.材料：2.器材：平；试管10mL)；吸管0.1mL、1mL、5mL；研钵；漏斗；离心管10mL)；容量瓶10mL)；离心机；分光光度计 3.试剂：(1) 标准蛋白质溶液：称取100mg牛血清蛋白，溶于蒸馏水并定容至100mL，制成1000μg·mL-1的母液；取出10 mL该溶液，用蒸馏水稀释成100μg·mL-1的母液。 (2) 考马斯亮蓝G-250试剂：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL 95%的乙醇中，加入85%(m/v)的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1000mL，此溶液可以在常温下放置一个月。、方法和步骤0～100μg·mL-10～100μg·mL-1(mL) 1 2 3 4 5 6 0～100μg·mL-10 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 马斯亮蓝G-250试剂 5 5 5 5 5 5 (μg·mL-1) 0 20 40 60 80 100 取6支试管，按表2-1数据配制0～100μg·mL-1牛血清蛋白溶液各1mL。准确吸取所配各管溶液0.1mL，分别放10mL具塞试管中，加入5mL考马斯亮蓝G-250试剂置2min后，在595nm下1h内完成)。以牛血清蛋白含量(μg·mL-1)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘出标准曲线。 （2）0～100μg·mL-1蛋白质标准曲线的制作 取6支试管，按表2-数据配制0～100μg·mL-1牛血清蛋白溶液各1mL。0～100μg·mL-1的标准曲线。 表2-2 0～100μg·mL-1蛋白质标准液的配制 试剂(mL) 1 2 3 4 5 6 0～100μg·mL-1蛋白质标准溶液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水 1.0 0.8 0