1第四章食品卫生细菌学检验技术详解.pptVIP

食品卫生细菌的检测技术 （2）LTSE培养基的各种成分都是经过了很多试验反复摸索研制成功的，其营养丰富，抑制杂菌效果强，具有加快目的菌生长发育和促进发酵缓慢的大肠菌群产酸产气的效果。在证实试验中增加了氧化酶试验反应，具有排除非肠道杆菌对乳糖发酵产气的特殊功能。本方法不必加入指示剂，便于做证实试验。 （3）本方法研制成功后，经不同的卫生监测单位实验考核各类食品样品共计703件，结果与常规法总符合率为99.3％；而与美国标准（ANSl）A-1快速法比较,其特异性与敏感性为优。 食品卫生细菌的检测技术 2．革兰氏染色的涂片检查说明 本方法加有涂片检查，主要是进一步证实大肠菌群的形态，因本方法的LTSE培养基SDS加的量大，SDS抑制革兰氏阳性菌的效果好且不影响大肠菌群的生长，如果检验人员没有时间，可以省去涂片和镜检这两步，结果其可靠性仍在99％以上。 3．操作注意事项及经验介绍 （1）检样要严格遵守操作规程，避免技术操作的差错。由于大肠菌群是呈分裂繁殖生长，在水中往往具有聚集性及分布不均匀的现象，因此检样前固体和液体样品如同常规法一样，要经过前处理。 食品卫生细菌的检测技术 （2）培养基灭菌后，童汉氏小管（小倒管）中应无气泡方能使用；做氧化酶试验的小试管要清洁干净。 （3）本方法灵敏度高，37℃15h培养与常规法符合率基本一致（即99％～100％），超过15h可提高检出率。 （4）初次观察试管法氧化酶试验难以辨别真假阳性结果，可采用氧化酶阳性结果的非肠杆菌科菌株做阳性对照，如绿脓杆菌、脑膜炎双球菌、弧菌科菌株等等。 食品卫生细菌的检测技术 三、TTC（氯化三苯四氮唑）显色快速法 （一）培养基 1． TTC乳糖培养基 （1）2％乳糖发酵管 成分： 乳糖20g、蛋白胨20g、蒸馏水1000mL、pH7.4。 制法： 将乳糖、蛋白胨溶解于蒸馏水，调节pH为7.4，分装于含有小倒管的试管中，每管2.5mL，110℃经15min高压灭菌后备用。 （2）TTC培养液 成分： 蛋白胨20g、氯化钠10g、磷酸钠（Na2HPO4·12H2O）10g、十二烷基硫酸钠4g、蒸馏水1000mL、pH7.4。 食品卫生细菌的检测技术 制法： 将以上成分加热溶解，调pH7.4，分装于三角瓶，于121℃经15min灭菌后，冷至室温，备用；临用前加入无菌100g/L的无菌TTC水溶液8mL，轻轻摇匀。 （3）分装 以无菌操作，把TTC培养液分装2％乳糖管中，每管加2.5mL，培养后无污染者可使用。 2．三料TTC乳糖培养基 除蒸馏水外，其他成分按TTC乳糖培养基3倍，TTC 2倍，制法同上（加入TTC后培养液稍有云雾状混浊，是正常现象，不影响培养结果）。 （二）检验方法 1．接种 每份样品以无菌操作接种1mL、0.1mL及0.01mL各3管于TTC乳糖培养基中，如接种量为10mL，则用三料TTC乳糖培养基。 2．培养 接种后，置35～37℃温箱培养18～24h。 食品卫生细菌的检测技术 （三）结果判断 观察TTC乳糖培养液有无产红色及产气，结果判定如表7-3。 表7-3 显色法大肠菌群结果判断 食品卫生细菌的检测技术 （四）结果报告 根据阳性管数，查表7-2“大肠菌群最可能数MPN检索表”。 四、DC（去氧胆酸钠）半固体试管快速法 （一）培养基 1．成分 蛋白胨 1.5g 氯化钠 0.5g 乳糖 lg K2HPO4·3H20 0.3g 柠檬酸铁铵 0.2g 10％去氧胆酸钠水溶液 lmL 0.4％BTB 1.6mL 安氏指示剂 2mL 琼脂粉（或琼脂条0.8g） 0.7g 蒸馏水 lOOmL pH 7.2 食品卫生细菌的检测技术 2．制法 将以上固体成分加热溶解于水，调整pH7.2，随即加入二组指示剂与10％去氧胆