2.细胞分离和细胞培养概述.pptx

细胞生物学研究方法 《生命科学导论》-细胞学基础 教 师: 曲鑫建 讲师 联系方式: 电子信箱: xinjinqu@163.com 生命与医药学院 2014.06.21 细胞分离和细胞培养 一、细胞分离（ cell separation） 二、细胞培养 （cell culture） 一、细胞分离（ cell separation） 1. 制备单一细胞悬液 组织 多细胞悬液 消化 2. 分离不同类型细胞 A. 离心 （centrifugation） B. 细胞的黏附性 C. 亲和性表面 D. 流式细胞仪(flowcytometer,FCM) 原理： 用带有荧光的特异抗体标记待分离的细胞，然后在流式细胞仪中选出标记细胞。 细胞分选: 1cell in 1000 5000 cells/sec E. 激光捕捉显微切割技术(LCM) 激光捕获显微切割： 在不破坏组织结构，保存要捕获的细胞和其周围组织形态完整的前提下，直接从冰冻或石蜡包埋组织切片中获取目标细胞 ，通常用于从组织中精确地分离一个单一的细胞。 其原理是用乙烯醋酸盐聚合体膜覆盖在被选择的细胞上，然后用红外激光熔化膜，这时膜与组织在目标位置牢固结合，当膜被提起时，仅目标细胞留在膜上，这些细胞直接在膜上进行裂解,再进行2DE分离及蛋白质组分析或用 SELDIT0F进行分离与分析。 原理： 二、细胞培养 （Cell culture） 从活体组织分离出特定细胞,在一定 的条件下进行培养,使之能够继续生 存、生长以至增殖的一种方法。 in vivo： 用动物做实验 in vitro：用培养细胞做实验 1.细胞培养的条件 A .固体表面 B .培养基、血清 C .无菌、抗生素 D. 37℃、5％CO2 、95～100％湿度 2.细胞培养的不同阶段 传代 细胞系（Cell line） 成功 筛选 细胞株（cell strain） 原代培养(primary culture) 传代培养(secondary culture) 原代培养(primary culture):直接从生物体获取细胞进行培养。 传代培养(secondary culture):将原代培养的细胞连续以一定比例扩大培养。 细胞系(cell line):原代培养细胞成功传代即为细胞系。 细胞株(cell strain):从培养细胞中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 　　功能：保持原分化特性 　 形态：多不保持原有细胞形态 　　 　　 培养细胞的特点： 可无限增殖、传代 　　 细胞系（NIH3T3: 1963年由小鼠成纤维细胞建立） 　接触抑制:细胞系在固体表面生长繁殖,在互相接触后,即培养皿长满一单层细胞后停止分裂、增殖。 细胞系的来源： （１）变异细胞 特点: 可在培养皿中以极高的密度增殖， 没有扩展的余地时,可向空间生长。 （２）由癌细胞建立的“癌细胞系” （３）正常细胞经诱导建立的“转化细胞系” 3.细胞克隆（Cell cloning） 克隆（clone）：指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。 思考题 1. 简述流式细胞术分离细胞技术原理？ 2. 简述细胞培养的条件？举例加以说明。 谢谢！