2.蛋白质4详解.ppt

第五节 蛋白质的重要理化性质 一、蛋白质分子的大小与分子量测定 （一）根据化学组成测定最低相对分子量 利用化学分析定量测定蛋白质中某一特殊元素的含量，并假定蛋白质分子中含1个这种元素，即可测算最低相对分子质量Mr。 如用化学分析法测定血红蛋白质中含Fe 0.335％，则最低 Mr=(55.84/0.335)×100=16700 用其它方法测定，其实际Mr为16700的4倍，由此可知，血红蛋白含有4个Fe的原子，而不是1个Fe。 (二)滲透压（Osmotic pressure）测分子量 当用一种半透膜将蛋白质溶液与纯水隔开时，只有水分子能自由的通过半透膜进入蛋白质溶液，而蛋白质分子却不能通过它进入到纯水中。这种溶剂分子由纯溶剂（或稀溶液）向溶液（或浓溶液）单方向的净移动现象称为渗透。 由于渗透的结果，溶液内的体积增加，液面升高，直到达到一定的净水压力时维持平衡，这时的净水压力就是溶液在平衡时的渗透压。也就是为了制止溶液与纯溶剂之间的净移动所需施加于溶液的压力。 （三）蛋白质的扩散 如果分子在蛋白质溶液中造成浓度差，例如不小心把纯水放在蛋白质溶液的上面，则蛋白质分子将从下面的高浓度区向上面的低浓度区迁移，直到达到平衡为止。这时，蛋白质分子将均匀的分布在整个溶剂系统中。由于浓度差引起的这种溶质分子的净迁移称为平移扩散或扩散。 扩散系数（diffusion coeffecient) 扩散系数随Mr的增加而降低。但扩散系数对Mr的变化并不敏感。对球形的大分子来说，扩散系数与Mr的立方根成反比。 扩散系数与沉降系数结合，可以给出蛋白质的精确相对分子质量。 电泳的原理 电泳时颗粒受两种力作用： F电场力=qE＝q.(U/s) F摩擦力＝f v= 6prhv 当颗粒以恒定速度移动时： F电场力= F摩擦力 qE ＝f v 或 v/E=q/f 泳动度:μ= v/E SDS原理(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳) SDScont’d 4. 蛋白质的复性 变性因素除去后，变性蛋白质又可回到天然构象，活性全部或部分恢复，称为复性（renaturation）。 恢复的好坏、快慢与变性的激烈程度有关，与去除变性因素的方式有关，与自身结构的复杂程度有关。 蛋白质变性的可逆性∶ 可逆变性∶是指使蛋白质变性的条件解除后，能恢复其原有性质。 不可逆变性∶是指使蛋白质变性的条件解除后，仍不能恢复其原有性质。 在不同的pH条件下，两性离子的状态也随之发生变化。 氨基酸可以视为弱多元酸 H2A+ + H2O ? HA0 + H3O+ Ka1 = [ HA0 ] [ H3O+ ] __________________________ [H2A+ ] 1.3:氨基酸的酸碱化学 The second dissociation (the amino group in the case of glycine): HA0 + H2O ? Aˉ + H3O+ Ka2 = [ Aˉ ] [ H3O+ ] _______________________ [ HA0 ] Glycine滴定曲线 Glutamic acid滴定曲线 Lysine滴定曲线 氨基酸的等电点（isoelectric point）的计算 氨基酸等电点的计算：侧链不含离解基团的中性氨基酸，其等电点是它的pKa1和pKa2的算术平均值：pI = (pKa1 + pKa2)/2 同样，对于侧链含有可解离基团的氨基酸，其pI值也决定于两性离子两边的pKa值的算术平均值。 酸性氨基酸： pI = (pKa1 + pKaR-COO- )/2 碱性氨基酸： pI= (pKa2 + pKaR-NH2 )/2 例：求天冬氨酸等电点 pI=(pK1+pKR)/2=(2.09+3.86)/2=2.97 一个物质的等电点等于使这个物质处于等电状态下，左右两边的两个pK值得算术平均值，即pI，而与其他pK值无关。 不可逆沉淀：强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水，由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。 尿素 双缩脲 2. 双缩脲反应 双缩脲在