新药研发中药物方法建立与验证分析报告.pptVIP

八、基质效应 基质效应：由于样品中存在干扰物质，对响应造成的直接或间接的影响。 取空白生物基质(如血浆)与空白溶液对比，照准确度项下方法，制备高、中、低3个浓度的QC样品(每一浓度至少5个样品)，每个样品分析测定1次 5、分析方法优化： 色谱柱 流动相：水相（盐，酸），有机相（甲醇，乙腈） 柱温 流速 6、提取方法优化： 蛋白沉淀：甲醇、乙腈、三氯乙酸 液液萃取：乙酸乙酯、乙醚、甲基叔丁基醚等 进行预实验、方法学验证 新药分析方法建立 溶解性、配制方法、稳定性 分子量扫描、确定离子对、内标 建立初步分析方法 尝试提取条件 优化 方法学初步考察 预实验（血药浓度、半衰期、代谢产物等） 方法学验证 正式试验 谢谢大家！ * * 五、定量限 方法定量限(limit of quantitation，LOQ) ——系指在保证具有一定可靠性(准确度与精密度符合要求)的前提下，能测定出生物样品中药物的最低浓度 ——又称为方法灵敏度(sensitivity) ——标准曲线上的最低浓度点(最低浓度点≥LOQ) 要求 ——应能满足测定3～5个消除半衰期后生物样品中的药物浓度 ——准确度在80%～120%(或RE在±20%的范围内) ——RSD＜20% * * 六、稳定性与质量控制 稳定性——包括方法稳定性和样品稳定性 方法稳定性——方法的耐用性 样品稳定性——生物样品的存放条件和时间、冻-融循环 测定法——QC样品穿插于实际样品测定全过程 ——模拟(或实际)生物样品及其预处理后的待测溶液进行考察 要求 ——准确度85%～115%(RE在±15%范围内)，RSD＜15% * * 七、提取回收率 生物样品的预处理方法 ——提取回收率，≥70% 取空白生物基质(如血浆)，照准确度项下方法，制备高、中、低3个浓度的QC样品(每一浓度至少5个样品)，每个样品分析测定1次 另取等量的相同3个浓度的含药血浆，经提取处理后同法测定 * * 第四节 药物分析方法 应用示例 供试品A进行生物等效性研究 文献调研： 性质：物理性质——溶解，配制 吸收过程——血药浓度 蛋白结合率——提取方法 代谢 分析方法 预处理方法 根据文献调研结果开展实验 1、确定检测方法 2、确定内标 3、确定检测离子对（分子量扫描） 4、确定分析及提取方法 * * 体内药物分析 体内药物分析 新药研发中药物分析方法建立与验证 袁艳娟 2015.04.17 * * 分析方法的设计依据 分析方法建立的一般步骤 分析方法验证的内容与要求 药物分析应用示例 内容提要 * * 第一节 分析方法的设计依据 建立分析检测方法的主要依据 待测药物的理化性质及在生物体内的存在状况 分析测定的目的与要求 生物样品的类型与预处理方法 实验室条件 * * 一、待测药物的理化性质及体内存在状况 准确测定生物样品中的药物或其特定代谢物 ——预处理——待测物从结合物或缀合物中释放 选择样品预处理方法——首先应考虑 ——待测药物的理化性质 ——药物在生物体内的存在状况 ——药物在生物体内的生物转化(代谢)途径 * * (一)待测药物的理化性质 药物的pKa值、亲脂性、溶解度、分配系数等——预处理及检测方法 具有亲脂性——在适当的pH值下用溶剂萃取 具有强极性或亲水性——沉淀蛋白、固相萃取、离子对萃取或衍生化后萃取等 具有挥发性——GC测定法 具有光谱或电化学特性——分析检测方法 药物的稳定性——萃取浓缩技术 对酸碱不稳定——避免使用强酸或强碱性溶剂 对热不稳定——避免高温蒸发溶剂 * * (二)待测药物的体内存在状态 ?与血浆蛋白结合的强弱及结合率的高低 ——分离萃取方法 ?蛋白结合较强——不宜直接采用溶剂萃取 ?体内浓度高低、代谢过程及其代谢产物 ——分析检测技术 ?浓度较低（尤其有代谢产物共存） ——代谢产物的干扰与特定代谢产物的同时测定 ——采用LC-MS等分析检测技术 * * 二、分析测定的目的与要求 ?药代动力学——研究药物在体内吸收、分布、代谢和排泄过程 ——血浆浓度随时间的变化过程；代谢途径及代谢产物 要求 ——同时测定原形药物和代谢产物 检测 ——宽线性范围(Cmax～Cmax的1/20)、高灵敏度(10-9g/ml)和高专属 性(分离能力)(原形药物及其代谢产物的分离) 方法 ——不必强调方法的简便、快速； ——大多采用色谱及其脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MS ?毒代动力学——确定新化合药物预期人用剂量水平与其毒性水平之间的安全范围 * * 三、生物样品的类型与预处理方法