医学遗传学18遗传疾病的诊断(修改)课件.pptVIP

第十八章 遗传疾病的诊断 遗传病诊断是一项复杂、需要多学科密切配合的工作。 遗传病诊断包括常规诊断、特殊诊断 临床上遗传病诊断包括 临症诊断 症状前诊断 出生前诊断 植入前诊断 第一节 临症诊断 临症诊断：（symptomatic diagnosis） 根据患者的各种临床表现进行分析，确诊并判断遗传方式，是遗传病诊断的主要内容。 一、病史、症状和体征 二、家系分析 三、细胞遗传学检查 四、生化检查 一、病史、症状和体征 一、病史、症状和体征 （一）病史采集 家族史 婚姻史 生育史 （二）症状与体症 二、家系分析 三 细胞遗传学检查 染色体检查的指征： １．明显的生长发育异常、多发畸形、智力低下者 ２．多发性流产和不育的夫妇 ３．性腺及外生殖器发育异常者 ４．原发闭经者 ５．高龄孕妇 ６．已经生有染色体异常患儿的夫妇 ７．身材高大，性情粗暴的男性 ８．恶性血液病患者 ９．长期接受X射线、电离辐射的人员 三 细胞遗传学检查 染色体原位杂交：应用标记的DNA片段与玻片标本上的细胞、染色体，以及间期的DNA或RNA杂交，研究核酸片段的位置、相互关系的技术。 荧光原位杂交(Fish)：用生物素、地高辛等标记探针，原位杂交后，用荧光染料标记的生物素亲和蛋白、抗亲和蛋白的抗体进行免疫检测和杂交信号放大，使探针杂交的区域发出荧光。 四、生化检查 生化检查：是遗传病诊断的重要辅助手段，主要是对由于基因突变所引起的酶和蛋白质的定量和定性分析，对单基因病和先天性代谢病进行诊断，包括一般的临床生化检验和针对遗传病的特异检查 第二节 出生前诊断 出生前诊断（产前诊断）：采用羊膜穿刺或绒毛取样等技术，对羊水、羊水细胞和绒毛进行遗传学检验，对胎儿的染色体、基因进行分析诊断，是预防遗传病患儿出生的有效手段。 一、产前诊断的对象 ①夫妇之一有染色体畸变，特别是平衡易位携带者，或者夫妇染色体正常，但出生过染色体异常的患儿的夫妇 ②35岁以上的高龄孕妇 ③夫妇之一有开放性神经管畸形，或出生过这种畸形患儿的夫妇 一、产前诊断的对象 ④夫妇之一有先天性代谢缺陷，或出生过这种患儿的夫妇 ⑤X连锁遗传病基因携带者孕妇 ⑥原因不明的习惯性流产的孕妇； ⑦羊水过多的孕妇； ⑧夫妇之一有致畸因素接触史的孕妇； ⑨具有遗传病家族史，又系近亲婚配的孕妇。 二、出生前诊断方法 B超 羊膜穿刺法 二、出生前诊断方法 绒毛取样法 二、出生前诊断方法 脐带穿刺 胎儿镜检查 孕妇外周血胎儿细胞富集 植入前诊断 第三节 基因诊断 分子诊断（基因诊断）：利用分子生物学技术，检测患者体内遗传物质（DNA或RNA）的结构或表达水平的变化，从而作出临床诊断的技术。 一、基因诊断的主要技术方法 （一）核酸分子杂交　 1．斑点印迹杂交 2．原位杂交　 3．PCR-ASO 4．基因芯片技术 （二）其它常用的技术 （1）PCR-RFLP （2） PCR-SSCP （3）RT-PCR （4） Western印迹技术 核酸杂交 DNA变性：DNA分子由双螺旋结构变为单链的现象 DNA复性：变性的两条单链恢复双螺旋结构的现象,可发生在同源双链间，也可发生在非同源两条链间 核酸分子杂交：应用核酸分子的变性和复性的性质，使来源不同的DNA(或RNA)片段，严格按照碱基互补配对原则，在一定条件下形成杂交双链分子 聚合酶链反应 PCR-ASO 基因探针（probe）：一段与目的基因或DNA片段互补的特异的单链核苷酸序列 ASO：等位基因特异性寡核苷酸 正常探针：一种与正常基因序列完全一致，能与 之稳定杂交； 异常探针：另一种与异常序列完全一致，能与突 变序列稳定杂交 基因芯片技术 限制性核酸内切酶 简称限制酶或内切酶，能特异地识别和切割特 异的核苷酸序列 限制酶能识别和切割通常为4～6个核苷酸回文 序列，限制性位点或切点 切割方式： 交错切割 产生粘性末端 水平切割 产生平齐末端 RFLP（限制性片段长度多态性） 由于DNA序列的差异，造成了内切酶位点的变化，或是新的酶切位点的产生；或是原酶切位点的消失等，酶切后，所产生的片段长度发生变化。 PCR-RFLP 是将聚合酶链反应与RFLP方法结合的一种检测技术。 该方法包括：PCR、酶切、电泳 PCR-SSCP 二、分子诊断技术的应用 （一）基因诊断在遗传病中的应用 1．镰状细胞贫