19生化-蛋白质的生物合成技术总结.pptVIP

mRNA与遗传密码 蛋白质是由20种氨基酸组成的，不同的蛋白质中氨基酸排列顺序不同，这种排列顺序是按基因中碱基顺序决定的。 1966年破译了所有氨基酸的密码子 遗传密码的特征（重点） 1 密码子的特点 ①每个三联体密码子决定一种氨基酸 除Trp和Met只有1个密码子外，其它18种氨基酸均有1个以上的密码子，Phe、Tyr、His、Gln、Glu、Asn、Asp、Lys、Cys各有2个密码子；Ile有3个密码子；Val、Pro、Thr、Ala、Gly各有4个密码子；Leu、Arg、Ser各有6个密码子。 ②理化性质相近的氨基酸的密码子排列较近，有利于在基因突变时不大影响蛋白质的性质。 ③mRNA上的密码子是连续的，两个密码子间无任何成分分隔，即无间断讯号。 理解：若在读框中间插入或缺失1或2bp，会造成移码突变，引起突变位点下游氨基酸排列错误。 ④AUG是起始密码子， UAA，UAG，UGA是终止密码子。 ⑤密码的摆动性或变偶性。 指的是密码子与反密码子的配对不严格遵守碱基互补配对原则 ⑥密码子有简并性(degeneracy) 一种氨基酸有几个密码子的现象称为密码子的简并性。 ⑦密码子有通用性，即不论是病毒、原核生物还是真核生物密码子的含义都是相同的。 但线粒体的密码子有例外： 核糖体活性位点 1. mRNA结合位点： 位置：30S亚基头部 组成：S1、S3、S4、S5、S12、S18、S21蛋白，16S rRNA的3?端序列。 作用：负责与mRNA、tRNA的初始结合，是起始因子IF3的结合位点。 2. P位点： 位置：30S亚基，一部分位于50S亚基 组成：主要涉及蛋白质有L2、L14、L18、L24、L27、L33 作用：与起始氨酰tRNA结合 3. A位点： 位置：靠近P位，主要在50S亚基 组成：主要涉及蛋白质有L1、L5、L7、L12、L20、L30、L33，16SrRNA。 作用：新的氨酰tRNA结合位点 4. 肽基转移酶结合位点 5. EF-TU结合位点 6. EF-TG结合位点 蛋白质合成后的加工与折叠（了解） 蛋白质合成后的加工、折叠、输送。 1、N-端的甲酰甲硫氨酸的切除 2、二硫键的形成 3、氨基酸残基的化学修饰 4、蛋白质前体中某些肽段的切除（酶原） 5、亚基之间、亚基与辅基之间的聚合 蛋白质生物合成的阻断剂（了解） 1.抗生素类阻断剂 eg.链霉素、氯霉素 2.毒素类阻断剂 eg.白喉毒素、植物毒蛋白 3.蛋白质类阻断剂eg.干扰素、eIF2蛋白激酶 以下省略（可自学）-----副密码子与氨酰tRNA的合成 第一类和第二类合成酶与tRNA的相互作用有所区别 经晶体结构分析，两类酶与tRNA接触的方位正好相反，所形成的复合物互成镜像结构 编码多个蛋白质的….. spacer长度较短时,两个顺反子使用相同的核糖体或小亚基( 相当于正常的S-D序列到起始密码子的距离，有S-D 序列的特征） 起始tRNA: 能特异识别mRNA模板上起始密码子的tRNA a、 核糖体蛋白质按一定顺序与rRNA及蛋白质结合 b、 rRNAs是亚基中的骨架 c、 蛋白质和rRNA必须形成完整的核糖体结构才能发挥各自的功能 S1以及S18、S21组成的结构域负责与mRNA、起始tRNA和IF3因子的结合 5s rRNA位点靠近肽基转移酶位点，5SrRNA与tRNA的T4C环的互补可能与tRNA进入有关，但还缺乏有力证据 肽基转移酶位点－－－Peptidyl transferase 指第一个肽键形成以前的各步反应 formyl－－－甲羧基 methionyl----甲硫氨酰 cofactor－－－辅因子 （30S亚基有选择转译起始点的能力，但没有主动结合的能力） 30S 亚基与mRNA 的结合 mRNA 5? 端的SD序列与小亚之内的16S rRNA的 3? 端……… mRNA 分子的折叠、 30S 亚基蛋白质 RF 作用于A 位点（需要 P 位被肽酰－tRNA 所占据） 体外实验证实，RF 与终止密码子之间特异的相互作用，类似于tRNA的反密码子和密码子之间的碱基配 对的相互作用 Ridge－－脊背 stalk－－茎、柄 protuberance－－隆起 Nascent－－－出生的 脱酰基tRNA转移至E位点使A位点出现有利于新的氨酰－tRNA结合的构象（空间结构改变）；当新的氨酰－tRNA与A位点结合后，使E位点结构改变，脱酰基-tRNA脱离E位