新一、-铜陵市食品药品监督管理局课件.ppt

用甲醇洗脱 甲醇 真菌毒素 甲醇中纯的真菌毒素 亲和柱分离用的泵流操作架 关键参数： 溶液含醇量：低于15％，最高不超过20％。 取5ml，加70％甲醇5ml，加水至50ml,含甲醇约14% 溶液浑浊：影响免疫亲和柱净化 微纤维滤纸滤过 加适量吐温－20（最多1ml） 流速 空气干燥问题 免疫亲和柱多次使用 检测 色谱条件：C18柱，流动相为甲醇－乙腈－水（13.5：13.5：73→20：20：60）梯度洗脱，流速1.1ml/min 色谱柱：SHIMAZU VP-ODS（150mm） 进样量10～50μl 荧光检测器，激发波长365nm，发射波长450nm 黄曲霉毒素分析为什么需要衍生 B1和B2在紫外光下可产生蓝色荧光, G1和G2则产生黄绿色荧光，所以采用荧光分析法。但是 B1 和G1碰到水后，会产生荧光淬灭作用，产生的荧光信号大幅度的减弱，无法实现ppb级的定量检测。 经过衍生和未衍生的黄曲霉毒素的色谱图比较： 检测 柱后光化学衍生 B1,G1光化学衍生法的原理 柱后光化学衍生优点 1 安装调试简单，开机即可用。 2 不需要其它衍生剂，保证了HPLC系统的重现性和使用寿命。 3 通用性，除做黄曲霉毒素，还可以对其它如农药和磺胺等适用。 4 便宜。不到电化学衍生器价格的1半,不到化学衍生设备价格的1/4。 药典中衍生方法：柱后碘衍生 B1, G1碘衍生法的原理 黄曲霉毒素测定过程中的质量控制 线性与校准曲线 随行回收或随行工作对照 空白对照（采用的试剂和水一般要经过特别净化，分析过程中有良好的操作规范，保证不受到环境等污染） 检测限 黄曲霉毒素测定过程中的质量控制 回收率试验 什么时候要做回收率？ 怎么做回收率？ 黄曲霉毒素测定过程中的质量控制 实验室首次进行并建立黄曲霉毒素检测方法时，应进行回收率试验。 方法验证回收率 三水平添加，0.5、2（5）、10ppb，每个3份，共9份。 回收率要求70~110% 黄曲霉毒素测定过程中的质量控制 每次检测时进行回收率试验 随行回收率 至少做1份限度水平的随行回收率。 黄曲霉毒素测定过程中的质量控制 通过质控样品的测定验证方法的可行性 参加能力测试（盲样测试、比对试验等) 黄曲霉毒素测定过程中的安全问题 安全防护 相对独立的试验空间 所有仪器、文具、白大褂等专用 操作过程中全程带手套 黄曲霉毒素测定过程中的安全问题 对照品的使用 购买液体对照品（相对安全的浓度） 黄曲霉毒素测定过程中的安全问题 试验废弃物的处理 试验用器皿用1%次氯酸钠溶液浸泡过夜后再进行清洗。 废弃物也要用次氯酸钠灭菌后再丢弃。 流动相废液用次氯酸钠灭菌后归为一般废液处理。 中国药典2010年版 品种：桃仁、僵蚕、胖大海 陈皮、酸枣仁 限量要求：B1：≤5μg/kg B1/B2/G1/G2总量：≤ 10μg/kg 黄曲霉毒素残留检测 管大平 2012年7月13日 主要内容 一、黄曲霉毒素介绍 二、黄曲霉毒素检测方法 三、黄曲霉毒素检测过程质量控制 四、黄曲霉毒素检测安全防护 黄曲霉毒素 黄曲霉毒素危害事件： 1960年，在英国东南部一些农场中，有大约10万只火鸡不明原由地突然死亡，一时间在人群中造成了极大的恐慌和不安，当时命名为“火鸡事件”。1961年发现饲料中混有的花生粕能够使大鼠诱发肝癌，1962年鉴定了这种致癌物质，并命名为黄曲霉毒素。从此，世界各国科学界开始对真菌毒素的研究引起了广泛的重视。 黄曲霉毒素的产生 由曲霉菌黄曲霉、寄生曲霉、集峰曲霉和伪溜曲霉4种产生。 五种黄曲霉毒素： B1、B2 、G1、G2、M1。 黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1在体内经过羟化而衍生成的代谢产物。 黄曲霉毒素的致癌性 国际肿瘤研究机构 IARC分类定为1级致癌物 致癌力是奶油黄的900倍，苯并芘的4000倍。 黄曲霉毒素 B1同肝细胞DNA的鸟嘌呤碱基结合，使得控制细胞生长的基因代码发生错误，从而使细胞生长失控，成为癌性肿瘤。 黄曲霉毒素的急性毒性： 氰化钾的10倍，砒霜的68倍。 黄曲霉毒素的慢性毒性：亚致死量产生慢性中毒，长期接受低剂量导致肝癌。 黄曲霉毒素的