HPLC法测定市售可乐和茶叶中咖啡因的含量.doc

实验一 HPLC法测定市售可乐和茶叶中咖啡因的含量 1 实验目的 掌握液相色谱法测定市售可乐和茶叶中咖啡因的含量的原理、色谱分析的参考条件及各项操作。 2 原理 样品经过前处理后，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱柱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。 3 试剂 色谱纯甲醇、超纯水 4 仪器设备 Agilent1200系列液相色谱 5 样品处理： 市售可乐饮料经超声脱气15 min, 先用普通漏斗过滤, 再经0. 45 μm 滤膜过滤 准确称取预先烘干的茶叶1. 000 g 于100 mL 锥形瓶中，加约90 mL 水，在100 ℃水浴锅中浸提1 h 后冷却至室温，过滤，滤液转移到100 mL 容易瓶中，洗涤残渣3 次一并转入容易瓶，定容至刻度线，再经0. 45 μm 滤膜过滤上样分析 6 色谱条件： 本实验采用1200系列 高效液相色谱仪带紫外检测器; 色谱柱:AgilentC18 4.6 mm × 250mm，5 μm ; 流动相: 甲醇:水 55：45，V /V ; 流速: 1.0 mL·min － 1 ; 检测波长: 272 nm; 柱温: 35℃; 进样量: 10 μL。 7 实验结果计算 样品中咖啡因的含量按下式计算： 式中：X——样品中咖啡因的含量，g/kg； A——进样体积中咖啡因的质量，mg； V2——进样体积，mL； V1——样品稀释液总体积，mL； m——样品质量，g。