洋葱生物技术育种2014.10汇编.ppt

生物技术在洋葱育种上的应用 洋葱组织培养 洋葱远缘杂交 洋葱雄性不育系分子标记的辅助选择 洋葱的基因工程 一、洋葱组织培养 1、分生组织培养 洋葱茎尖培养有较多研究，多采用MS培养基，并附加BA和NAA等生长调节物。 Phillips等发现，毒莠定(picloram)对洋葱茎尖培养的效果比用NAA更好，实验证明，洋葱、A. rifoliatum、阿尔泰葱、实亭葱等茎尖在含毒莠定和6BA的培养基上还诱导出了体细胞胚。 2、器官培养 起始外植体材料种类多：鳞茎盘、幼叶、花器官、鳞片等 鳞茎盘组织作为外植体进行组织培养被认为是生产试管苗的有效方法。 花蕾和叶片也较容易诱导植株再生。Pike和Yoo 等将洋葱未成熟花蕾培养在附加5 mg/L 6BA和NAA的MS培养基上，从小花直接诱导出不定芽。 3、胚培养和试管受精 1966年Guha首次报道授粉洋葱的子房和胚珠在Nitsch培养基上可以成出植株和种子 Eady等用0.5-1.5 mm大小的洋葱幼胚在含5 mg/L毒莠定的培养基上高频率诱导出体细胞胚及植株再生。未成热胚培养可以有效地拯救杂种胚的败育，从而提高远缘杂交的成功率。 成熟的合子胚培养也是胚培养的另一种类型。 Luther和Bohanec用两步法培养获得再生植株。该法先将成熟期花在含2 mg/L 2，4-D和6BA的培养基上培养6d后，再将花或分离的子房转入含2 mg/L TDZ( thidiazuron)的分化培养基上直接再生出苗。 4、原生质体培养与体细胞杂交 王光远等首次将洋葱叶肉原生质体在附加2,4-D,和6BA的MS培养基上培养获得愈伤组织，转移到NAA和KT的培养基上后获得了小植株的分化。 Hansen等将洋葱悬浮细胞系分离的原生质体培养得到再生苗。葱属植物原生质体再生体系的建立可能应以培养细胞，特别是培养的胚性细胞来分离原生质体为宜。 受原生质体再生体系难以建立的限制，葱属植物原生质体融合和体细胞杂交成功的报道极为罕见。直到1998年，Buiteveld等报道获得了韭(A.ampeloprasum)与洋葱体细胞杂种再生植株。这是至今得到的唯一成功的葱属植物种间体细胞杂种。 5、洋葱单倍体诱导 意义 历史 Muren 1989首次利用未授粉胚珠培养获得单倍体 培养方式：未授粉的胚珠、子房、花蕾（开花前3~5天） 研究方向：提高再生频率、染色体加倍、遗传稳定性 Media composition on haploid induction frequency Salt：B5或BDS Regulators： 2mg/l BA + 2mg/l 2,4-D Liliana EM(2000) putrescine（腐胺） 预培养15天，再培养于添加spermidine （亚精胺）的培养基上提高了再生频率 Genotype on haploid induction frequency the effect of donor genotype has the highest influnce on the haploid induction rate. Muren 1989 ，2.5% 5-7.6% （Bohanec, et al 1995, B.Campion, et al 1992, 1995. M.Jakse, et al, 1996 ） Bohanec and Jakse(1999) 18.6–22.6% for line and 51.7% for individual plants Chromosome doubling. 2.5mM of colchicines or 50μM of oryzalin （Geoffriau E. et al 1997 ） 二、远缘杂交 大葱(A. f istu losum L. )具有许多洋葱缺乏的抗性基因,且与洋葱同属,一直是洋葱种间杂交的首选材料。 洋葱作为母本或父本与大葱杂交获得的F1都具有中间形态性状，纤细的鳞茎，偏向大葱的叶部形状，花杯状,花序和开花时间都处于两亲本的中间，F1都高度不育。 己获得洋葱“大葱×洋葱，洋葱×大葱，洋葱×A oschaninii，洋葱x实葶葱，洋葱×大葱×A roylei种后代。 洋葱雄性不育系的细胞学形态观察 Holford P(1991)研究洋葱S型雄性不育系 1.在小孢子的四分体阶段，绒毡层细胞未成熟就退化 。 2.在小孢子二分体阶段，绒毡层过度生长、肥大，随后自溶。 3.绒毡层形态完全正常，只是存在的时间过长。 Restriction Fragment Length Ploymorphism (RFLP) marker The onion genome belongs to th