细胞的破碎和DNA的提取.docVIP

1菌株总DNA的提取 采用高盐法门提取DG一3菌株的总DNA: 将DG一3菌株划平板活化，挑单菌落接种于sml培养基中，50℃剧烈振荡培养过 夜*10%接种量转接至50m1LB液体培养基培养至对数生长期末期、l20 兀叼min，离 心 smin*几N洗涤菌体*离心收集菌体*悬浮于10ml的兀N中*加10m留ml溶菌 酶1助l 终浓度10印留ml ，37℃水浴2h一加入20m留ml蛋白酶K助1 终浓度 1001之留ml ，再加入lml的10%SDS 终浓度1% ，50℃水浴过夜一加入1/3体积的 饱和氯化钠剧烈振荡155、12000r/min，离心10min、上清用等体积的酚:氯仿抽提至 两界交界处澄清，1200 川min，离心smin收集上清*加入1/10体积醋酸钠、0.6体积 的异丙醇沉淀，用毛细玻璃管勾出絮状沉淀*70%乙醇洗涤，吹干叶溶于花或几R 加 RNA酶的几 中，备用。