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PCR室菜鸟培训手册 实时荧光定量PCR的定量方法有两种：一种是绝对定量；另一种是相对定量。 ①绝对定量：就是我们分子室每天做的工作（HBV,HCV,CT/UU/TB/HSV…），绝对定量的测定结果准确，但需要目的片段的标准品，通过绘制标准曲线来计算出测定结果。 ②相对定量：（在通常情况下，并没有目的片段的标准品，为了计算出一个值，就必须采取相对定量的方法，这也是实验研究常采取的方法之一）。相对定量需要借助一个内参基因（像β-action，GAPDH…起空白的作用）作比对，以间接计算出目的基因的测定值。其计算公式如下： △Ct Ct（目的基因）-Ct（管家基因） △△Ct △Ct（实验组）-Ct（对照组） 相对表达量 2-△△Ct PCR结束后，一个良好的扩增曲线会有如下特征： ①曲线拐点清楚，特别是低浓度样本曲线指数期亦明显； ②扩增曲线整体平行性好，其平行性一定程度上反应定量结果的重复性好坏； ③基线平直或略微下降，无明显上扬趋势，阴阳分界清楚； ④扩增曲线整体平行性好，表明各管扩增效率相近，曲线越上扬明显，表明扩增效率越好。 PCR基本术语和概念（以绝对定量为例）： Baseline（基线）：PCR最初几个循环的荧光值作背景值。 Threshold（阈值）：一条人为设定在PCR指数增长期的直线。 Ct值：每条荧光扩增曲线与所设定的阈值（Threshold）相交时对应的循环次数