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新药药理学 ——支气管哮喘病特效药研究方案及临床前筛选和实验方法概述 四川大学华西药学院 2012级 8班 周鹏翔 2012141661009 一、研究背景概述 1．选题及意义 支气管哮喘是由多种细胞（如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等）和细胞组分参与气道慢性炎症性疾患。这种慢性炎症导致气道高反应性的产生，通常出现广泛多变的可逆性气流受限，并引起反复发作的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，常在夜间和（或）凌晨发作、多数患者可自行缓解或经治疗缓解(((。而有关支气管哮喘，众多细胞因子参与其发作，其中白介素23（IL23）水平和哮喘发作密切相关。IL-23是2000年发现的细胞因子，具有多种生物学功能，并在多种疾病中发挥重要作用。近年来，IL-23 在支气管哮喘中的作用得到了关注。因此，以IL-23为作用靶点的药物可能对支气管哮喘产生积极的疗效。 2.作用因子及靶点 IL-23由p19和IL-12中的p40 两个亚基组成，它们之间以二硫键相联结。人和鼠的p19 相应蛋白质中均含有5个半胱氨酸残基，无N-糖基化位点，两者有70％同源，其蛋白质组成大部分与IL-12p35、IL-6和G-CSF相近，因而在小鼠体内的药理学实验结果对人有一定的借鉴意义。IL-23的受体由IL-12R中的一个亚基IL-12Rβ1和IL-23R两个亚基组成。人IL-23R的基因定位于人1号染色体距离IL-12Rβ2大约150 kb的地方。人T细胞、自然杀伤细胞（NK）包括NK白血病细胞均可以表达IL-23R[2]。因此，本“新药X”（下称X药）选择以肺组织细胞中IL-23R为作用靶点，特异性竞争性地抑制IL-23和其受体结合，减少其表达蛋白产物的生成，从而缓解支气管哮喘。 3．靶点选择的文献依据 通过构建动物模型，分为正常组、哮喘组，应用ELISA 法检测两组小鼠外周血IL-23 水平、RT-PCR 法检测肺组织中IL-23p19mRNA 表达、免疫组化法检测肺组织中IL-23 表达;分离小鼠脾脏T淋巴细胞进行体外培养，应用RT-PCR 法检测小鼠脾脏T淋巴细胞IL-23p19mRNA表达水平、Western blot检测IL-23p19蛋白表达情况[3]（图片以及表格数据均引用于该文章）。结果表明哮喘小鼠中，IL-23 在血清、肺组织、脾脏T淋巴细胞中表达均较正常小鼠明显增高（P0.01）45只雌性C57/6J小鼠随机分为哮喘组、肥胖哮喘组（肥哮组）和对照组各15只。卵白蛋白激发致敏和高脂饮食制作肥胖哮喘模型，计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数并分类，酶联免疫吸附法法测定肺组织匀浆中白细胞介素（IL）-17、IL-23和8-异前列腺素2α（8-iso-PGF2α）水平。结果表明：肥哮组肺组织匀浆的IL-17、IL-23和8-iso-PGF2α水平分别为(65.83±5.69)pg/ml、(141.52±14.62)pg/ml和（61.33±7.75）pg/ml均高于哮喘组和对照组（P0.05）[4]。 二、针对特定靶点离体筛选的方法 X药拟特异性阻断肺组织细胞的IL-23R，从而发挥治疗支气管哮喘的作用。由于细胞因子必需通过与其相应的受体结合后才能具有生物活性，因此以炎症细胞因子受体为靶位建立受体拮抗剂的筛选模型，对不同来源化合物(组合化学库、天然产物等)进行筛选，有可能获得相应受体的拮抗剂，这些拮抗剂通过和受体天然配基(炎症细胞因子)竞争结合受体，从而可以达到降低细胞因子活性治疗炎症等疾病的目的[5]。 离体建立基本的药物筛选的总体思路是，从天然产物中选择适当的筛选模型，筛选得到一系列化合物，进一步优化后得到先导化合物，随后进行高通量筛选（High-throughput screening, HTS），最终得到目标几种有效的化合物，进而利用现代仪器分析的各种手段鉴定这几种化合物的结构，依据药物化学等方法的构效关系对该化合物进行结构修饰以从理论上完善其分子结构，从而指导该类化合物的全合成或半合成的进行，并且以有利于其在体内的药效学和药动学性质，若有明显毒性或副作用的结构则淘汰，这为进一步的临床前研究做好理论准备。 X药采用受体配体结合技术的离体筛选模型，即从细胞、分子水平进行药物筛选，其基本机制是X药阻断IL-23与其IL-23R的特异性结合，从而筛选出高效专一的肺组织细胞IL-23R拮抗剂。 具体方法可以概述为：通过文献调研，从大量土壤（四川、云南、贵州等地）真菌代谢产物中提取出具有舒张支气管平滑肌、止咳、抗肺部炎症等临床疗效的成分，将小鼠的离体肺组织细胞膜受体作为筛选模型，利用高灵敏度的放射性同位素标记X药，利用X药与IL-23R高度特异性结合形成受体-配体复合物，并通过测量