普通遗传学实验指导书导论.doc

《普通遗传学》实验指导书 实验一 植物细胞减数分裂实验二 玉米一对相对性状的遗传分析 实验三 果蝇的生活史及形态观察 实验四 果蝇唾腺染色体的观察 实验五 果蝇的双因子杂交实验 实验六 果蝇的伴性遗传 实验七 果蝇的连锁交换与基因定位 实验八 细胞核内脱氧核糖核酸的定性鉴定 实验九 植物多倍体的诱发与鉴定 实验十 蚕豆根尖微核检测技术 实验十一? 人群中PTC味盲基因频率的分析 实验十二 植物基因组DNA的提取 实验课是普通遗传学课程教学中的一个重要环节，遗传学实验的目的主要有两方面：一是验证遗传学的基本规律，帮助理解和记忆遗传学的基本理论；二是学习和掌握遗传学研究的基本操作技能，为将来从事遗传研究或继续深造打好基础。本实验指导书是参考有关资料，结合农学、园艺专业的特点编写而成，所选材料主要是植物，在教学过程中，根据实验条件和学时数，从中选开有关实验，实验的顺序视材料的准备情况会有变动。 实验一 植物细胞减数分裂 一、实验目的与要求 1.掌握植物花粉母细胞减数分裂的取材、固定和染色制片方法。 2.了解减数分裂各个时期染色体变化特征。 二、实验原理 减数分裂是保证各物种世代间染色体数目恒定的基础，仅在配子形成过程中发生，包括连续两次细胞分裂，而染色体只复制一次，结果形成四个核，每个核只含有单倍数的染色体，即染色体数目减少一半，所以称作减数分裂。减数分裂的连续两次分裂都包括前期、中期、后期、末期等各个时期，但第一次分裂的前期的变化最为复杂，又可分为细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期，出现同源染色体的配对、交换等现象。 三、实验材料、用具和药品 1.材料：玉米、小麦、蚕豆的花序固定材料。 2.用具：显微镜、解剖针、镊子、刀片、恒温箱、载玻片、盖玻片、染色缸、试剂瓶、酒精灯、纱布、吸水纸等。 3. 药品：无水乙醇、冰醋酸、卡诺固定液、蒸馏水、醋酸洋红、改良品红。??? ?四、实验方法与步骤 1.取材固定：掌握各植物的最适时期和最适时间，保证大量花粉母细胞处于减数分裂时期，一般在上午9~11时取材效果较好；取好的材料立即放入卡诺固定液中，在低温处固定 2~24h，在80%乙醇中处理半小时后，用70%乙醇保存于冰箱中。 2.解离：挑出花药，经过70%酒精，再用蒸馏水冲洗，在 1N HCl中60℃恒温下解离5~15min，用蒸馏水冲洗后用于染色压片。 3.染色：取出花药吸去多余液体，放在载玻片上，加一滴醋酸洋红或改良品红，用镊子反复挤压花药，使花粉母细胞完全溢出来，尽可能去除残渣药壁，酒精灯上稍加热，放置 2~3 min，使染色体充分着色。 4.压片：盖上盖玻片，用刀片架起盖玻片一角，中指和食指按住盖玻片边缘，用镊子尖轻敲几下，使花粉母细胞分散，移去刀片，在酒精灯上迂回稍加热后，用手指垂直压片。 5.观察：在显微镜下观察花粉母细胞减数分裂的各个时期的图象。 五、思考与作业题 1.绘出所观察到的减数分裂各时期的典型图像。 2.在形成生殖细胞的过程中，染色体数目是怎样减数的？ 3.减数分裂与有丝分裂的主要区别是什么？ 实验二 玉米一对相对性状的遗传分析 一、实验目的与要求 通过玉米一对相对性状的杂交试验，观察和分析杂种后代的性状表现，加深分离规律的理解。 二、实验原理 玉米籽粒胚乳非糯性和糯性由一对等位基因(Wx和wx)控制，且非糯(Wx)对糯(wx)为显性，由非糯和糯亲本杂交的F1植株能形成Wx和wx两类配子，由于带有Wx和wx基因的花粉对I-KI液有不同的颜色反应，可通过测定得出1:1之比。 三、实验材料、用具和药品 1.材料：玉米籽粒胚乳非糯性(Wx)和糯性(wx)杂交F1代的花粉。 2.用具：普通生物显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、计算器等。 3.药品：1％I-KI溶液。 四、实验方法与步骤 取糯性与非糯性杂交F1花粉，用1％I-KI溶液染色，低倍显微镜下观察，计数蓝黑色(非糯)和红褐色(糯性)花粉粒数目。 五、思考与作业题 将统计数据全班汇总填入下表，每人进行χ2测验或仅检验自己的结果是否符。 实验三 果蝇的生活史及形态观察 一、实验目的与要求 1.了解果蝇生活史各阶段的形态特征，观察果蝇的几种常见的突变类型。 2.掌握辨别雌雄果蝇的方法。 3.了解果蝇的饲养方法和处理方法。 二、实验原理 果蝇属于昆虫纲，双翅目，完全变态，生活周期短，生长迅速，繁殖能力强，每交配一次可排卵400~500个，其生活周期与温度密切相关，大于30℃时大部分死亡或不育，20℃时，生活周期为15天，25℃时，其生活周期为10天，在小于10℃的环境下，其生活周期为57天，所以，果蝇培养的最适温度是20~25℃。果蝇形体小，生长迅速，繁殖率高，饲养简便，突变性状多，是遗传学研究的极