实验一徒手切片法学案.ppt

实验一 徒手切片法 徒手切片法 利用刀片或有柄剃刀徒手将材料切成薄片后置于载玻片上进行活体观察，或经过一系列药品处理，制成永久片子。 此法既可做临时制片，必要时也可作成永久制片。 方法简便、快速，要求设备简单。 徒手切片技术要求熟练，才能切出符合要求的薄片，切片厚度为20-25um。 一、实验目的 练习徒手切片法进行制片； 学习番红-苯胺蓝二重染色方法； 观察双子叶植物幼茎和叶片的横切面结构 。 二、实验材料及用品 实验材料：海桐花幼茎和叶片。 实验用具：单、双面刀片；载、盖玻片；显微镜；镊子；培养皿；胡萝卜块（2cm×1cm×0.3cm）等。 实验药品：蒸馏水、各级浓度的酒精（35%，50%，70%、85%，95%，100%）、1/2二甲苯+1/2纯酒精，二甲苯，1%番红水溶液，1%苯胺蓝的95%酒精溶液，加拿大树胶。 三、实验步骤 1. 取材：选择发育正常，有代表性的幼茎或叶片，用刀片从植株上割下，立即进行切片或保存在水中以防萎蔫； 2. 切片：取茎的一小段长约1-2cm （如果是叶片等较为柔软的材料用胡萝卜或土豆等作为支持物，叶片大小为1×1cm），以左手的拇指、食指和中指夹住材料（要求材料突出在指尖上面约2-3mm），用右手握住刀片，刀口向内，以均匀的动作做横切面切片（切片时刀口和材料表面都要经常湿水，使之滑润），多切，掌握技巧，切片放入培养皿清水中充分展开； 注意： 刀片由左前方向右后方一次切下，中途不要停顿，切记拉锯式切割和用力过猛。 切片时两只手不要紧靠身体或压在桌面上，动作要求使用臂力而非腕力。 切片厚度不要太厚，否则最后封片时盖玻片盖不上，一边会翘起来。 三、实验步骤（续） 3. 固定：切得的薄片选择较薄且透明和相对完整的切片移入70%的酒精中，使材料固定； 4. 观察：将材料置于载玻片上，在低倍显微镜下观察，如内部结构清晰即可进行下面步骤； 5. 复水：将70%AL倒出 50%AL（5min） 蒸馏水（5min） 6. 染色：用1%番红水溶液染色30min-1h（染色时番红尽可能时间长些） 7. 冲洗：用蒸馏水冲去表面红色染料； 8. 脱水： 50%，70%、85%，95% AL各5min； 9. 对染：用1%苯胺蓝染液染色30s-5min； 10. 用95%AL溶液快速冲去多余染料； 11. 100%AL脱水两次，每次5min； 12. 透明： ?纯酒精+ ?二甲苯（5min） 二甲苯（5min）； 13. 封片：用加拿大树胶封藏，封片时镊子先呈45°角放置盖玻片，后轻放，忌气泡。 四、实验结果 切片充分且透明，细胞重叠不明显，在显微镜下能清楚地观察茎或者叶片的各部分横切面的内部结构； 木质化细胞壁呈红色；纤维素细胞壁呈蓝色；细胞质呈淡蓝色。 五、作业 实验完毕，每人交制好的玻片标本1片，在标签纸写上玻片名称及自己的姓名和日期； 实验报告（姓名和日期） 实验报告内容 实验名称 实验目的 实验材料及用品 实验步骤（可简化） 实验结果（主要是制片质量结果，不需要绘图） 实验中出现的问题、分析原因及解决办法。 * * 【图片说明】 可多切一些标本，以便从中选取较好的进行观察。 切取的标本 材料和夹持物 滴水 放置标本 加盖盖玻片 叶的横切 * 【图片说明】 可多切一些标本，以便从中选取较好的进行观察。 * *