alt活力测定、血清总胆固醇含量测定、尿酮体检测.ppt

二、血清总胆固醇测定(p112) 一、血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力 测定（p125） 三、尿酮体的定性检测(p120) 实验五十一 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力测定（p125） 体内两种重要的转氨酶 谷丙转氨酶（ ALT ；GPT）： 谷草转氨酶（ AST ；GOP）： 肝中活性最高 心肌中活性最高 临床意义 血清转氨酶活性，可作为临床疾病诊断和预后的指标之一。 在病毒性肝炎的潜伏期、急性发病期，以及隐性感染者均可有血清ALT升高；心肌梗死患者血清中AST明显升高。 转氨酶属细胞内酶，血清中的活性很低 ，患病时，细胞膜通透性增高或细胞破坏，转氨酶大量释放入血，造成血清中转氨酶活性明显升高。 定时比色法（两点法） 酶联-紫外连续监测法 [测定方法] 酶联-紫外连续监测法 L-丙氨酸+α-酮戊二酸 丙酮酸+L-谷氨酸 丙酮酸+NADH L-乳酸+NAD+ 在340nm连续监测NADH的消耗量，从而计算出ALT的活力 原理： ALT LDH 定时比色法 国内采用的比色测定法有三种： 赖氏法（30min） 金氏法（60min） 改良穆氏法（30min） 1. 原理、试剂和操作步骤，作用时间略不同。 2. 主要不同点在其单位定义和标准曲线的绘制方法，因此，测定结果的单位数值也不相同。 标准曲线中两种酮酸的量客观反映酶作用的实际情况。 标准曲线上的单位数字也准确反映了酶活力大小。 3. 测定结果可以直接与分光光度法相比较。 国内较多采用赖氏法，其优点为： 改良赖氏法测定ALT活力 [原理] 与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活力。 为什么结果是可信的？ 吸收光谱有所不同，在520nm比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙的光吸收远较丙酮酸二硝基苯腙为低。 在反应后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加，使干扰减少。 [操作] 试 剂（ml） 对照 1 2 3 4 5 2mmol/L丙酮酸标准液 0 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 底物溶液 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.1mol/L 磷酸缓冲液(pH7.4) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37℃水浴5min；然后各管分别加入2,4-二硝基苯肼 2,4-二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 混匀，37℃水浴20min，然后各管分别加入0.4mol/L NaOH 0.4mol/L NaOH 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 相当于ALT活力单位 0 28 57 97 150 200 A520 1．标准曲线绘制 取大试管6支编号，按下表操作： 混匀，10分钟后以对照管调零，测定520nm波长的吸光度。 2．酶活性测定 取中试管2支，编号，按下表操作： 试 剂 对 照 测 定 血清 — 0.1 0.1mol/L 磷酸缓冲液(pH7.4) 0.1 — 底物溶液 0.5 0.5 混匀，37℃水浴30min，然后各管分别加入2,4-二硝基苯肼 2,4-二硝基苯肼 0.5 0.5 混匀，37℃水浴20min，然后各管分别加入0.4mol/L NaOH 0.4mol/L NaOH 5.0 5.0 A520 混匀，10分钟后以对照管调零，测定520nm波长的吸光度。 [参考正常值] ALT 40U/L [要求] 反应时间要控制好 停止反应要迅速 血清吸取用移液器更准确 2人1份，两步反应一起完成 实验四十三 血清总胆固醇测定（p112） 胆固醇 结构： 分布：广泛存在动物体内，脑及神经组织最为丰富。 具有环戊烷多氢菲结构 功能 临床意义：血清总胆固醇正常值2.59-6.47mmol/L；含量过高，胆固醇代谢可能发生障碍。AS患者的血清胆固醇含量往往偏高。因此测定血清总胆固醇含量将有助于诊断疾病。 是合成胆汁酸，维生素D以及甾体激素的原料；参与形成细胞膜。 方法：比色法（硫磷铁法、硫酸-醋酐法）; 胆固醇氧化酶法（试剂盒法） 原理： 血清总胆固醇(TC) 游离胆固醇(FC) 胆固醇酯(CE) CE 胆固醇酯酶 FC ＋ FFA 37℃水浴 FC 胆固醇