种质分离，培养和应用的技术操作规范-海洋生物种质库.docVIP

裙带菜(Undaria pinnatifida)种质分离，培养和应用的技术操作规范 中国科学院海洋研究所海洋生物种质库 联系人： 逄少军博士 电话：0532Email:sjpang@ website: 中国青岛市南海路7号，266071 内容目录 裙带菜的生物学特征，生活史------------------------1 裙带菜的地理分布，自然生活环境--------------------2 裙带菜养殖的简短历史------------------------------3 裙带菜种质的分离技术------------------------------4 裙带菜种质的长期保存技术--------------------------5 裙带菜种质的丰富培养技术--------------------------6 裙带菜种质的复苏技术------------------------------7 裙带菜种质在种苗培育和杂交育种上应用技术----------8 中国科学院海洋研究所海洋生物种质库保存的不同物种裙带菜品系目录和可以提供的技术服务种类--------------9 裙带菜的生物学特征，生活史 裙带菜(Undaria pinnatifida)隶属于褐藻门(Phaeophyta)，褐藻纲(Phaeophyceae)，裙带菜目(Laminariales)，翅藻科(Alariaceae)，裙带属(Undaria)，是一种一年生、生活在潮下带2-20米水深的温水性大型褐藻，长成的海藻长度1-2米，取决于生长环境。裙带菜自然分布在俄罗斯太平洋沿海，日本，朝鲜半岛海岸和中国北部沿海。由于人类活动的影响，裙带菜自从上世纪70年代开始逐步扩散到新西兰，欧洲，美洲，大洋州等地区。裙带菜具有明显的异型世代交替的生活史，由显微的单倍雌雄配子体和双倍的大型孢子体组成。裙带菜的孢子囊在长日的早春-夏季形成，带双鞭毛的游孢子从孢子囊中释放后，在附着基上附着和萌发形成单倍的配子体，并以配子体形式渡过夏季的高水温期。秋天当水温下降到23oC以下后，配子体完成发育，雌配子体排出的卵子受精形成孢子体。孢子体的营养生长（长度和重量的增长）主要在冬季的低水温期（5-20oC）完成。裙带菜的异型世代交替生活史见图1。 图1 裙带菜的异型世代交替生活史是由孢子体，雌雄配子体组成。 裙带菜养殖的简短历史 裙带菜主要作为人的食品直接食用，此外还是水产动物鲍鱼和海胆的重要的鲜活海藻饵料。长期以来一直是我国重要的水产增养殖的水产品种类，主要的养殖基地在我国的辽宁，山东等地。我国裙带菜人工养殖有20多年的历史，养殖规模和产量长期位居世界首位，总产量达到20万吨鲜品以上。裙带菜的人工养殖分人工育苗和海上养成两个阶段。人工育苗采用常温（20-25oC）渡夏的方法，在每年的7-8月将成熟的裙带菜种菜的孢子囊叶阴干并大量释放游孢子，释放的游孢子附着在用棕绳编制的苗帘上，利用自然光并根据幼苗的生长阶段进行适当的调整，进行全人工育苗。整个育苗过程历时3个月。当海水温度下降到适宜于幼孢子体生长的范围后，幼苗被转移到海上暂养，并完成分苗养殖。 裙带菜种质的分离技术 裙带菜的种质保存主要是指保存单倍的雌雄配子体。在低温、低光的条件下，使用煮沸或者高压消毒的天然海水，添加营养盐来进行长期培养和保存。早在上个世纪初，欧洲的海藻学家就观察和报道了裙带菜类褐藻的单倍配子体的形态特征和在一定条件下只进行营养生长形成丝状体的规律。由于大型双倍的孢子体的实验室的培养和保存需要复杂的条件，同时也存在许多限制生长的因子，因而在生产和科研中，主要以保存配子体的方式来保存裙带菜的种质。而大型孢子体的获得主要是通过来年的海上养殖来获得。从理论上讲，由于裙带菜类单倍体配子体细胞的营养生长和增生是通过细胞有丝分裂完成的，不经过减数分裂的过程，因而增生的配子体不存在形状分化问题。这样，后代的孢子体的性状就不会发生变异。 图2是裙带菜的种质分离过程的简图。首先是选择成熟良好的种菜，用消毒海水冲洗后，用纱布对表面进行反复擦拭，除掉表面的附生杂藻，低温阴干24小时后，放置到消毒的低温海水中，放散游孢子。用消毒海水稀释游孢子溶液到每视野1-2个孢子的水平（X 100倍）。将1毫升的稀释液转移到9厘米培养皿中，加入10毫升PES培养液，在12小时光照，常温海水，1000lux条件下培养12天。之后，将光照强度降低到10倍，培养20天。之后在20倍显微镜下，用消毒的玻璃毛细管，将初长成的雌雄单倍体克隆逐个分出，分别培养在50毫升的消毒三角瓶。 图2 裙带菜单