20130503第9次_3章.ppt

一、固定化原生质体的特点 1、变胞内产物为胞外产物； 2、提高产酶率； 3、稳定性较好； 4、易于分离纯化。 二、固定化原生质体发酵产酶的工艺条件及其控制 （1）渗透压的控制； （2）防止细胞壁的再生； （3）保证原生质体的浓度。 三、酶发酵动力学(fermentation kinetics) 发酵动力学主要研究在发酵过程中细胞生长速度、产物生成速度、基质消耗速度以及环境因子对这些速度的影响。在酶的发酵生产过程中，研究细胞生长和发酵产酶动力学，对于了解酶生物合成模式、发酵条件的优化机制、提高酶产量，均有相当重要的意义。 细胞生长动力学 反应基质消耗动力学 酶生成动力学 微生物的生长过程可以用细胞浓度的变化来表示。以细胞浓度的对数与细胞培养时间作图，可知，在分批培养中，细胞生长一般经历调整期，指数生长期，平衡期，衰亡期。 （一）、酶生物合成的模式 比较酶产生与细胞生长的关系,可把酶生物合成模式分成4种类型: 。 通过计算比较的的生产与细胞生长的关系，可以把酶生物合成的模式分为4种类型：同步合成型、延续合成型、中期合成型、滞后合成型。 1.同步合成型 ：酶合成与细胞合成生长同步 （1）酶的生物合成可以诱导，不受分解代谢物阻遏和反应产物阻遏影响； （2）当除去诱导物或细胞进入平衡期后，酶的合成立即停止； （3）酶所对应的mRNA很不稳定。 2.延续合成型 延续合成型是指酶的生物合成在细胞的生长阶段开始，在细胞进入平衡期后，酶还可以延续合成较长的一段时间。 3.中期合成型 中期合成型是指：酶的合成在细胞生长—段时间以后才开始，而在进入细胞平衡期之后，酶的合成也终止。 4.滞后合成型 这种类型只有当细胞生长进入平衡期之后，酶才开始合成并大量积累。 影响酶生物合成的模式的主要因素是： （1）mRNA的稳定性； （2）培养基中阻遏物存在与否。 规律： （1）mRNA稳定性高，细胞停止生长后继续合成其所对应的酶； （2）mRNA稳定性差，酶的合成随着细胞停止生长而终止； （3）受某些物质阻遏，细胞生长一段时间或在平衡期后（解除阻遏），开始合成酶。 （4）不受某些物质阻遏，酶的合成随着细胞生长而同步增长。 选择与改造 （1）选择最理想的酶合成模式——延续合成型； （2）改造非理想模式 A、同步合成型：适当降低发酵温度，尽量提高相应的mRNA的稳定性； B、滞后合成型：尽量减少甚至解除分解代谢 物阻遏，使酶合成提早开始； C、中期合成型：努力提高mRNA稳定性，解 除代谢物阻遏。 （二）、细胞生长动力学 主要研究细胞生长速率及其受外界环境影响的规律。 1950年,法国的Monod首先提出表述微生物生长的动力学方程,细胞生长速率与细胞浓度成正比。 Rx =dX/dt= μ X 只存在一种限制性基质时: Monod方程是基本的细胞生长动力学方程; 从不同情况出发对其进行修饰。 μ : 比生长速率；S 限制性基质的浓度； Ks 莫诺德常数； μ m 最大比生长速率 连续全混流反应器发酵过程中,稳态时游离细胞连续发酵的生长动力学方程: dx/dt=(μ-D)X D：稀释率 D=0,分批发酵; Du ,细胞浓度增加; D = u,细胞浓度恒定; Du细胞浓度下降,S升高,u回升; Dum X趋于零; Monod方程与米氏方程相似,参数um与Ks也可由双倒数作图法求出. （三）、产酶动力学 宏观产酶动力学（非结构动力学）: 从整个发酵系统着眼,研究群体细胞的产酶速率 ； 微观产酶动力学（结构动力学）: 从细胞内部着眼,研究细胞中酶合成速率。 1、分类 研究细胞产酶速率及各因素对其的影响。 2、宏观产酶动力学方程通式 dE/dt=(αμ+β)x X—细胞浓度； u—细胞比生长速率； ?—生长偶联的比产酶系数； ?—非生长偶联的比产酶速率。 细胞产酶模式不同，产酶速率与细胞生长动力学关系也不同。 讨论: （1）同步合成型：生长偶联型 β=0，dE/dt=αμX （2）中期合成型：特殊生长偶联型 β=0，dE/dt= αμX 有阻遏存在时， α =0，无酶产生 dE/dt= 0 阻遏解除后才开始合成酶. （3）滞后合成型：非生长偶联型， α=0 , dE/dt=βX （4）延续合成型：部分生长偶联型， α≠0， β≠0 dE/dt= αμX+βX dE/dt=(αμ+β)x 有关模型参数一般通过线性化处理及尝试误差法求出. Section 5 动、植物细胞产酶 利用动植物细胞培养生产各种天然物质，是生物工程的一个新领域，20世纪80年代以来，利用植物细胞培养生产的有用产物已达100多种，其中酶制剂有10多种。包括糖苷酶(胡萝卜细