现代基因工程_01基因克隆和DNA学案.pptVIP

1. 2. 3. 蓝白斑 筛选 附： M13-纤维状噬菌体 M13是纤维状噬菌体的代表，在结构上与λ噬菌体有很大不同。 M13 DNA分子： 比λ噬菌体小得多，仅6 407bp 通常为环状双链，特殊为环状单链 M13 DNA分子相对较小的长度意味着它供外源DNA插入的空间要比λ基因组小得多。 可能原因： 1. M13的衣壳仅由3种不同蛋白的多拷贝组装而成(仅需3个基因); λ噬菌体头尾结构包含15种不同蛋白。 2. M13侵染周期相对λ简单一些，不需要将基因插入到宿主基因组中。 M13 DNA分子经纤毛注入大肠杆菌。 一旦细胞内新的单链DNA分子开始作为模板生成一条互补链时，就能够形成正常的双链DNA[图2-11(a)]。 这个双链分子不会插入细菌基因组，但会持续复制直到细胞中的拷贝数超过100[图2-11(b)]。 当细菌分裂时每个子细胞都得到一个或多个噬菌体基因组的拷贝，这些拷贝也能够继续复制，以保证每个细胞中的总拷贝数。 如图2-11(c)，新噬菌体颗粒持续组装和释放，每一个被侵染细胞在经过一代复制后都能够产生1 000个新的噬菌体。 M13作为克隆载体的吸引力 1. 基因组小于10kb： 对一个载体来说恰好处于令人满意的范围。 2. M13基因组的复制型： 非常像质粒，实验时也能够像质粒一样被处理。 3. M13