piRNA823：一种型非编码小RNA在结直肠癌中促肿瘤生成作用.pdfVIP

中文摘要 piRNA一823：一种新型非编码小RNA在 结直肠癌中的促肿瘤生成作用 摘 要 DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶 DNA methyltransferase． 甲基转移到特定碱基上的过程。DNMT分为两类：一类是持续性甲基转 移酶DNMT1，主要参与DNA复制过程中新合成链的甲基化；另一类是 从头甲基转移酶，包括DNMT3A和DNMT 3B，主要介导CpG位点甲基 化，通过表观遗传学机制调控细胞生长分化。DNA甲基化参与了基因组 印记、X染色体失活以及重复元件抑制过程，为正常发育所必需。近年来 研究发现，DNA甲基化异常可导致原癌基因激活以及抑癌基因失活，从 而导致癌症的发生。 结直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，其发生涉及基因突变及表观 遗传学改变。其中表观遗传学改变更为常见，且影响着数百个肿瘤相关基 因。DNA甲基化异常是最主要的表观遗传学改变，包括总体基因的低甲 基化和特定区域的高甲基化，前者可导致原癌基因激活，后者主要发生在 启动子区域的CpG岛，可导致抑癌基因失活，这两种甲基化异常在散发 性结肠癌发生中起着重要作用。 族蛋白结合，而不与Ago亚家族蛋白结合，因此被命名为piRNAs。最初， piRNAs被认为仅存在于生殖干细胞中，通过DNA甲基化沉默转座子来 维持基因组的完整性，从而在生殖干细胞中发挥着表观遗传调控作用。最 近，在多种癌细胞中发现了piRNAs的异常表达，如胃癌、宫颈癌、乳腺 癌和膀胱癌等等，且大量证据均表明，癌细胞与干细胞具有相似的表观遗 传信号，这暗示，piRNAs可能在癌症的发生中也发挥着相似的表观遗传 调控作用。 piRNA一823为piRNAs成员之一，在不同类型的肿瘤中其表达及作用 不同。在胃癌中piRNA．823表达降低，但在多发性骨髓瘤中其表达升高， 万方数据 中文摘要 并增加了从头甲基化水平，然而，piRNA．823在结直肠癌中的功能尚不明 确。 本课题旨在研究piRNA．823在结直肠癌中的表达及其对结肠癌细胞 系HCT116增殖、凋亡及克隆形成能力的影响，并进一步探讨其在结直 肠癌表观遗传调控中的功能，为开发以piRNAs为靶点的结直肠癌治疗提 供理论依据。 目的：研究piRNA．823在结直肠癌中的表达及其对结肠癌细胞系 HCT 116生物学行为的影响，并进一步探讨其对DNA甲基转移酶表达的 影响。 方法：从河北医科大学第二医院收集14对手术切除的新鲜结直肠癌 time 及其癌旁组织标本用于实验。应用real 116 直肠癌及其癌旁组织中的表达差异，并进一步应用结肠癌细胞系HCT 研究piRNA．823在结直肠癌中的功能。在HCT116细胞中转染piRNA．823 time RT—PCR观察转染效率。应 的抑制剂piRNA．823antagomir，通过real 用CCK．8实验检测细胞增殖情况，应用流式细胞术观察细胞周期变化， Annexin V／PI双染及TUNEL技术检测细胞凋亡情况，并进一步应用 western blot 观察其对DNMTl、DNMT3A、DNMT 3B表达的影响。 time 结果：@Real 的表达明显高于其配对的癌旁组织 尸 0．05 ，并且以癌旁组织为对照， 结肠癌细胞系HCT nmoFL、30nmol／L、100 1 antagomir 10 nmo儿 能明显抑制HCT16增 time 殖 P 0．05 ，且呈现出剂量依赖性。@RealRT．PCR结果显示，在 h，100 转染后48 nmolfL的piRNA．823 的表达 尸 o．05 。④流式细胞术结果显示，抑制piRNA．823表达后， 116细胞阻滞在G1 下降 氏0．01 ，表明抑制piRNA．823可以将HCT 万方数据 中文摘要 blot 116细胞凋 性 氏0．01 。以上结果表明，抑制piRNA．823可促进HCT 亡。⑥平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验均显示，抑制piR_NA．823 表达后，HCT1 blot 3A和DNMT3B的表达 结果显示，抑制piRNA一823可下调DNMT 氏0．05 ，而对DNMT 可能通过调节从头DNA甲基化水平参与结直肠癌发生。 3A和DNMT 结论：piRNA-823通过调节从头DNA甲基转移酶DNMT 3B的表达，促进结肠癌细胞凋亡，抑制其增殖，从而参与结直肠癌的发 生。piRNA．823有望成为结直肠癌治疗的新靶点。 万方数据 英文摘要 Novel SmallRNAActsasan Non--coding piRNA一823：a inColorectalCancer Oncogene ABSTRACT is a wherethe of DNA methylgroup methylationprocess the