染色体分带实验-10.12.22概述.pptVIP

二、实验原理 染色体分带是20世纪60年代末兴起的一项细胞学新技术。 其基本原理是借助于酸、碱、盐、酶等特殊的处理程序，对植物有丝分裂中期的染色体进行染色，使其在一定部位显示出深浅不同的染色带。 各染色体上染色带的数目、部位、宽窄、与深浅具有相对的稳定性，因而为染色体形态鉴别增添了辨认的依据。 染色体带纹的多样性反映了染色体的成分、结构、行为和功能的复杂性。因此，染色体带型分析为细胞遗传学、染色体工程等方面提供了新的研究手段。 植物染色体显带技术包括荧光分带和吉姆萨分带两大类。 目前在植物上最常用的是吉姆萨分带技术，其中C带和N带较为常用。 三、实验材料：黑麦 四、实验仪器及药品： 实验仪器: 显微镜: 制片、镜检 超低温冰箱（干冰或液氮）：冷冻揭片 温箱：恒温处理（Ba(OH)2） 恒温水浴锅: HCl, 2XSSC 定时钟，容量瓶，量筒，烧杯，试剂瓶，染色缸， 培养皿，载玻片架，载玻片，盖玻片，剪刀，镊 子，刀片, 滤纸等. * 实验二 染色体C-分带 一、实验目的　 掌握植物染色体C－分带技术及带型分析方法。 C带: Centromere Heterochromatin or constitutive Heterochromatin带。 主要显示着丝粒、端粒、核仁组织区或染色体臂某些部位的组成型异染色质。因其在染色体上的显带部位不同，分着丝粒带、端粒带、核仁组织区带和中间带等相应的名称。 植物染色体C-带主要包括以下四种带： 着丝粒带（Centromeric Band): 指着丝粒及其附近的带。 2. 中间带（Intercalary Band)： 分布在着丝粒至末端之间的带。 3. 末端带（Telomere Band): 位于染色体两臂末端的带。 4. 核仁组织区带（NOR band): 位于NOR区的核仁染色体专一带。 1B Triticum timopheevii, AAGG ? ? ? ? 1 1 2 2 分带前 分带后 药品: 无水乙醇: 脱水处理 冰醋酸（45%）: 压片 0.2NHCl: 2NHCl（母液稀释）弱酸处理 Ba(OH)2 ( 7%过饱和): 弱碱处理 2×SSC：20×SSC(175g NaCl+83.3g Na3C5H6O7-------- 1L) 1/15M Na2HPO4：23.876克Na2HPO4.12H2O加蒸馏水定容至1000ml； 1/15M KH2PO4： 9.07克 KH2PO4，加蒸馏水定容至1000ml； Giemsa母液： Giemsa粉１g+甲醇66ml＋甘油66ml 五. 实验方法 1．发根 2．预处理 3．固定 在45％冰醋酸洋红中浸泡片刻（室温），然后在45％冰醋酸压片。 同实验一 在显微镜下挑选染色体分散而完整的片子，在片子纵向一侧用铁笔写上编号,置于－70℃冰箱或液氮中冻片约20min，然后用刀片揭开盖玻片,置无水已醇中脱水约10分钟. 制片置超低温或液氮 （-70°C）冰箱 冰冻揭片 4.冰冻揭片 5.脱水 100%ETOH 室温10分钟 6. 弱酸和弱碱处理 将标本片子在0.2N?HCL中(60℃)处理2.5分钟，蒸馏水冲洗； 室温条件下饱和Ba(OH)2处理7分钟,用水彻底冲洗干净; 7.温育:流水冲洗后置2×SSC溶液(60℃)中温育60分钟。 8. 染色: 经蒸馏水冲洗，甩干后用Giemsa?染液染色?约10分钟左右Giemsa染色至适度 1/15M Na2HPO4 : 1/15M KH2PO4 = 2 : 1 20 ml 10ml 加20-30滴染液. 9. 镜检, 拍照. 蒸馏水冲洗干净, 气干, 滴上二甲苯, 盖上盖片. 10. 带型分析? 将已分带的标本，进行显微摄影，冲洗、放大，按核型分析方法将染色体编号进行带型分析，要求详细记录各染色体上各带纹的位置、宽窄、着色深浅和形状。最后绘制染色体模式图，在各条染色体模式图上标出各条带纹的位置、宽窄、深浅、形状等线条。 ??? *