大量制备单克隆抗体课件.ppt

模板来自于 / * * 迄今所获得的单克隆抗体多为鼠源性，对人而言具有较强的免疫原性，在人体内可引起较强的人抗鼠抗体反应，从而严重地限制了单克隆抗体在人体内的应用。此外，鼠源性单克隆抗体不能与人类抗体 Fc 受体结合。这也使得单克隆抗体在治疗方面陷入了低谷。随着重组 DNA 技术的发展，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体 目前哺乳动物细胞大量培养的许多方法已用于培养杂交瘤细胞中 * 单克隆抗体的大量制备 体内诱生法（IN ANIMALS） 体外诱生法（IN CELLS） 研究进展（RESEARCH PROGRESS） 1 2 3 CONTENTS CATALOG 取Balb/c雌性 经产鼠若干只 预处理：腹腔注射0.5ml液态石蜡或降植烷 注射器抽取腹水， 得到大量单克隆抗体 腹腔内接种1ml对数生长期的杂交瘤细胞悬浮液 1~2周后 体内诱生法 接种10天左右 腹水的杂交瘤细胞 Advantages 可得到大量的腹水单抗 获的抗体浓度高 操作简便、经济 腹腔有自然吞噬作用，避免组织污染造成的杂交瘤细胞生长不良 腹腔本身为杂交瘤细胞良好培养坏境，使其始终处于对数生长期 Disadvantages 腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白（包括Ig），提纯困难 有污染动物病毒的危险 鼠源性单抗有抗原性，在人体内产生人抗鼠抗体，降低治疗效果又诱发变态反应 将杂交瘤细胞置于培养瓶进行培养 得到单克隆抗体 离心去除细胞及其碎片 收集培养上清液 一段时间 体外诱生法 Advantages 减少鼠类动物疾病给产物带来的污染; 避免鼠的其它抗体的存在 过程可以工程化和自动控制, 提高了重演性 可以采用单元操作法培养, 随着规模增大, 降低生产成本 Disadvantages 得到的单克隆抗体有限，不能超过特定的细胞浓度 每天要换培养液，且细胞对剪切力和环境非常敏感 会积累有毒的代谢产物 血清培养干扰抗体活性，影响抗体分离，增加成本 牛初乳免疫球蛋白IgG单克隆抗体的制备 利用标准 IgG蛋白作为免疫原，免疫 6周龄 Balb/c 雌性小鼠，运用淋巴细胞杂交瘤技术，通过间接 ELISA法筛选，采用有限稀释法，经过 3次克隆筛选，获得2株稳定分泌抗 IgG蛋白的杂交瘤细胞株，单抗细胞注射小鼠腹腔收集腹水；亚类鉴定试剂盒确定单抗细胞亚类；测定收集小鼠腹水的抗体效价。 抗CPV-2a单克隆抗体的制备 纯化的犬细小病毒(CPV)2a型分离株免疫Balb/c 小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术，间接 ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行3次亚克隆，得到4株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，单抗细胞注射小鼠腹腔收集腹水；亚类鉴定试剂盒确定单抗细胞亚类；测定收集小鼠腹水的抗体效价。 模板来自于 / * * 迄今所获得的单克隆抗体多为鼠源性，对人而言具有较强的免疫原性，在人体内可引起较强的人抗鼠抗体反应，从而严重地限制了单克隆抗体在人体内的应用。此外，鼠源性单克隆抗体不能与人类抗体 Fc 受体结合。这也使得单克隆抗体在治疗方面陷入了低谷。随着重组 DNA 技术的发展，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体 目前哺乳动物细胞大量培养的许多方法已用于培养杂交瘤细胞中 *