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LOGO 食品微生物学检验菌落总数测定GB 4789.2－2010 2.1 菌落总数定义 食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 检验菌落总数的意义 菌落总数主要作为判定食品 被污染 的标志，是指一群在 平板计数琼脂 上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。 设备和材料 恒温培养箱 冰箱 恒温水浴箱 天平：感量0.1g 均质器 振荡器 设备和材料 食品卫生微生物检验室必须备有专用冰箱存放测试用标准菌种。 培养基和试剂 平板计数琼脂培养基 磷酸盐缓冲液 无菌生理盐水 样品的稀释 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。 样品的稀释 设备： ——拍击式均质器 ——剪切式均质器 样品的稀释 6.1.3用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 进行稀释时应注意取样的准确性。（如：吸入液体时应先高于吸管刻度，然后提起吸管尖端离开液面，将液体放至所需刻度。放液体时，不要让吸管接触稀释液的液面，可沿管壁放入，避免吸管外粘附的食品残渣进入稀释液体中）。 平板接种与培养 平板接种与培养 ? 根据食品卫生标准要求和对样品污染情况的估计，选择2～3个稀释度。加入样品时要防止外来的污染。 培养基倾注的温度与厚度是实验正确与否的关键。（倾注的温度：一般46℃，温度 过高会造成已受损伤的菌细胞死亡。厚度：直径9 cm的平皿一般要求15～20 mL培养 基。若培养基太薄，在培养过程中可能因 水分蒸发而影响细菌的生长）。 培养温度和时间 ? 36℃±1℃培养48 h±2 h。水产品30 ℃±1 ℃培养72 h±3 h。 ? 36℃培养和30℃培养结果差别较大，同样 水产品48 h结果和72 h也有差别。 关于蔓延菌落的描述 6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL）。 菌落计数 菌落计数 6.3.1 选取菌落数在30 CFU～300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 菌落计数 6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 菌落计数 6.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 菌落计数 注意： 如果高稀释度平板上的菌落数比低稀释度平板上的菌落数高，则说明检验过程中可能出现差错或样品中含抑菌物质，这样的结果不可用于结果报告。 菌落总数的计算方法 菌落总数的计算方法 7.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。 例：糕点面包 1：10两个平皿 ， 35 39 1：100两个平皿， 5 4 报告菌落总数为 （35+39）*10/2=370 菌落总数的计算方法 7.1.2若有两个稀释度的菌落数在合适范围，按照如下公式计算： N =∑C ∕ ( n1+0.1n2 ) d N :样品中菌落数 ΣC :平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和 n1 :第一稀释度（低稀释倍数）平板个数 n2 :第二稀释度（高稀释倍数）平板