RNAi干扰机制 庞招萍.pptVIP

RNAi作用机制1213100407 庞招萍 　免 疫 学 杂 志　第 21 卷　第 6期　2005 年 11 月　　IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol.21 No.6 Nov.2005 · 543 · 《RNAi 作用机制研究进展及其应用》 杨　媛, 王　蒙综述, 粟永萍审校 一、概述 RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。 双链RNA对基因表达的阻断作用 基因沉默，主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类: 1.TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录 2.PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。 二、作用机制 不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物或线虫细胞内, 与Dicer (dsRNA-specific endonuclease , Dicer)的C 末端结构域结合产生21～ 23nt siRNAs 片断(Small interfering RNA, 即siRNA)。每个片断的3′端都有2nt 核苷酸突出;Dicer 通过PAZ 结构域与含有PAZ 结构域的Argonaute 蛋白互相作用, 核酸内外切酶、解旋酶与Argonaute 蛋白相连进而与siRNA 一起形成具有多个亚单元的核糖核苷酸蛋白复合物(RNA-inducing silencingcomplex , RISC)。RISC 中的解旋酶应用ATP 解开siRNA 双链, 使其反义链互补结合到靶向mRNA 上与之相匹配的特异性序列, RISC 中的核酸酶降解mRNA , 降解的mRNA 随后迅速地被细胞其他的RNA 酶所降解。从而使目的基因沉默,产生RNAi 现象。此外, 解开siRNA 的双链后, 反义RNA 链能作为双链RNA 合成的一个引物, 以mRNA 为模板,在RISC 中的RNA 依赖的RNA 聚合酶(RNA-dependent RNApolymerases, RdRPs , 又称作RDRs)的作用下形成新的dsRNA,再次被Dicer 识别并切断, 形成新的siRNA 再循环作用于另外的靶向mRNA。这种不断放大的瀑布式作用形成大量新的siRNA, 使RNAi 作用在短时间内达到迅速并有效地抑制mRNA翻译形成蛋白质或多肽, 从而有效地抑制了靶向基因蛋白质或多肽的合成 。 三、与RNA 干扰作用相关的酶和蛋白 RISC 是RNAi 过程中一种关键复合物, 一般认为它可能具有内切核酸酶、外切核酸酶、解旋酶活性等。 1.Dicer在RISC 中具有重要作用,是RNA 酶Ⅲ 家族中dsRNA 特异性核酸内切酶,通过它可产生21 ～ 23nt siRNA片段 2.Mut-7是RISC 的成分之一 , 其基因与RNA 酶D 的外切酶区域具有同源性,Mut-7 蛋白含有外切酶活性必需的所有关键性催化基团, 在RNA i 降解mRNA 的过程中发挥重要作用。 3.RISC 中另一成分是PAZ/PIWI 家族的某种蛋白,包括线虫的RDE-1, 粗糙脉孢菌中的qde-2、拟南芥的AGO -1。 四、与RNA 干扰作用相关的“ 扳机点” Fire 等观察到在秀丽新小杆线虫dsRNA对RNAi 来说是重要的“ 扳机点”, 它可以有效诱导秀丽新小杆线虫的基因沉默。但也有其他的刺激物能引发沉默。（比如说：转基因） 另外有实验表明存在于秀丽新小杆线虫(C.elegans)中的RDE-1 和RDE-4在外源dsRNA 诱导的沉默调节中也是很重要的。 五、RNA 干扰的调节因子 在植物和线虫中, 由细胞间沉默信号传播引起的系统性沉默需要RNA 依赖的RNA聚合酶。 阻碍宿主防御反应的调节因子已在植物病毒中发现。这些病毒表达阻碍因子, 比如dsRNA 连接蛋白, 可以干扰宿主细胞的RNA 沉默机制。 在植物中一些RNAi 阻碍因子以RISC 为靶向或限制系统沉默信号的传播, 从而抑制RNAi。其他RNAi 的负面调节因子如ERI-1 。 . . . . . . 重点 总结RNAi的作用机制 我讲完了，谢谢观赏！ 有问题的同学， 请提问吧。 * *