生化4酶分析报告.ppt

一、酶促反应的特点 2. 高度特异性/专一性 (1)绝对特异性 2. 邻近效应与定向排列 酶促反应动力学: 概念 研究各种因素对酶促反应速率的影 响，并加以定量的阐述 (一)米－曼氏方程式 (二)Km与Vm的意义 （三）Km值和Vm值的测定 (2) Hanes 作图法 二、酶浓度对反应速率的影响 三、温度对反应速率的影响 四、pH对反应速率的影响 五、抑制剂对反应速率的影响 可逆性抑制作用 （reversible inhibition) （一）不可逆性抑制作用 （二）可逆性抑制作用 1.竞争性抑制作用 2.非竞争性抑制作用 3.反竞争性抑制作用 六、激活剂对反应速率的影响 非必需激活剂 变构效应剂 三、同工酶(isoenzyme) 催化相同的化学反应,酶蛋白的分子结构、理化性质及免疫学性质不同的一组酶 三种可逆性抑制作用的比较 反竞争性 抑制 竞争性 抑制 非竞争性 抑制 无抑制剂 E 与I结合 的组分 表观Km 最大速率 Km Vm 不变 增大 减小 减小 不变 减小 E、ES ES 竞交Y，非交X，反平行 概念 使酶由无活性变为有活性，或使酶活性增加的物质称为酶的激活剂 可提高酶的催化活性 种类 必需激活剂 2)不可缺少的 1)多为金属离子 酶 的 调 节 第五节 一、酶活性的调节 酶原的激活实际上是酶的活性中心形成或暴露的过程 （一） 酶原与酶原的激活 酶原 酶 激活 （无活性） （有活性） 有些酶在细胞内合成或初分泌时只是酶的无活性前体，必须在一定条件下才能表现出酶的活性。这种无活性的酶的前体称为酶原(zymogen) 活性中心 甘 异 赖 缬 天 天 天 天 缬 组 丝 S S S S 46 183 赖 缬 天 天 天 天 甘 异 缬 组 丝 S S S S 肠激酶 胰蛋白酶原 胰蛋白酶原的激活过程 胰蛋白酶 酶原与酶原激活的生理意义： 避免细胞产生的酶对细胞进行 自身消化 使酶在特定的部位和环境中发 挥作用 有的酶原可以视为酶的储存形式 体内一些代谢物可以与某些酶分子活性中心以外的某部位可逆结合，使酶发生变构并改变其催化活性。称为酶的变构调节 （二）酶的变构调节 变构激活剂 变构抑制剂 变构酶(多为寡聚酶) 变构部位 V 0 [S] 变构酶 变构抑制 变构激活 非变构酶 （三） 酶的共价修饰调节 酶蛋白肽链上的一些侧链基团在另一酶的催化下可与某种化学基团发生共价结合或解离，从而改变酶的活性 磷酸化 - - - 去磷酸化 乙酰化 - - - 去乙酰化 甲基化 - - - 去甲基化 腺苷化 - - - 去腺苷化 SH 与 – S — S – 互变 随着底物浓度的增高 反应速率不再成正比例加速；反应为混合级反应 [S] V Vmax 当底物浓度高达一定程度 反应速率不再增加，达最大速率；反应为零级反应 [S] V Vmax E ES E + + S P K1 K2 K3 依据： 中间产物学说 [S] K [S] V V m m + = Km= K2+K3 K1 V ≌ Vm 当 [S] Km时, 当 [S] Km时, V = Vm Km [S] [S] K [S] V V m m + = [S]：底物浓度 V：反应速率 Vmax：最大反应速率 Ｋm：米氏常数 底物浓度对反应速率的影响 一级反应 非正比关系 零级反应 Vm [S] Km+[S] Vm 2 = (1)V= Vm 2 时, Km=[S] [S] K [S] V V m m + = (2) Km= K2 + K3 K1 Km值近似于ES的解离常数Ks，这时Km值可表示酶对底物的亲和力 当 K2 K3 时 Km= K2 K1 = [E] [S] [ES] = Ks E ES + S K1 K2 　2) Km可近似表示酶对底物的亲和 力，Km值越大，亲和力越小 　3) Km是酶的特征性常数之一,同一 种酶对于不同底物有不同的Km值 Km： Vm：酶完全被底物饱和时的反应速率 1) Km等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度 (1) 双倒数作图法 应用： 寻找酶的天然底物，即酶的不同的底物中，Km值最小的底物 双倒数作图法 米氏方程两边取倒数： · 1 V = Km Vm 1 [S] + Vm 1 V= Vm [S] Km+[S] 1 V = Km+[S] Vm [S] 0 V 1 Km 1 [S] 1 Km Vm 斜率= 1 Vm 0 V [S] [S] Hanes作图法 1 V = Km Vm · 1 [S] + Vm 1 [S] V = Km Vm + Vm 1 [S] Km Km Vm 斜率= 1 Vm [S][E