发酵工程5发酵工业种子制备详解.ppt

本章内容： 种子制备原理与技术 影响种子质量的因素 种子质量的控制措施 种子制备的放大原理与技术 种子制备原理与技术 优良种子应具备的条件 生长活力强，延迟期短； 生理状态稳定； 浓度及总量能满足发酵罐接种量的要求； 无杂菌污染，保证纯种发酵； 适应性强，生产能力稳定 种子罐级数的确定 种子扩大的级数：制备种子需逐级扩大培养的次数 级数愈少，愈利于简化工艺及控制，并可减少种子罐污染杂菌的机会，减少消毒及值班工作量，减少因种子罐生长异常而造成的发酵波动。 确定方法 菌种的性质(如菌种传代后的稳定性) 瓶中的孢子数，孢子发芽及菌丝繁殖速度 发酵罐中种子培养液的最低接种量 种子罐与发酵罐的容积比 生产规模 随工艺条件的改变作适当的调整 种子质量的判断方法 通常检测的培养液中参数 pH是否在种子要求的范围之内 糖、氨基氮、磷酸盐的含量 菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观 有无杂菌污染 其他参数，如接种前酶活、种子罐的溶氧和尾气等 种子制备 步骤： 斜面培养基中活化； 扁瓶固体培养基或摇瓶培养基中扩大培 　养，完成实验室种子制备； 一级种子罐，制备生产用种子；视情况 　确定扩大级数，完成生产车间种子制备； 种子转种至发酵罐。 实验室种子制备阶段：琼脂斜面至固体培养基扩大培养（如茄子瓶斜面培养等或液体摇瓶培养 生产车间种子制备阶段：种子罐扩大培养 实验室种子制备 无菌方式接保藏的菌种至斜面培养基上，成熟后挑选正常菌落至试管斜面和摇瓶。 菌种产孢子能力强及孢子发芽、生长繁殖迅速，可用固体培养基培养孢子 菌种产孢子能力不强或孢子发芽慢，可用摇瓶液体培养法 不产孢子的菌种，保藏基础上，在一定温度下活化即可 种子扩大培养阶段 液体培养法：液体试管、三角瓶摇床振荡或回旋式培养。 表面培养法：茄子瓶、克氏瓶或瓷盘培养。 固体培养法：三角瓶、蘑菇瓶、克氏瓶、培养皿等麸皮培养。 生产车间种子制备 实验室制备的孢子斜面或摇瓶种子移接到种子罐进行扩大培养 种子罐培养： 一、获得足够的菌种数量， 二、种子罐的培养基接近发酵罐培养的醪液成分和培养条件，使菌体适应发酵环境 种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并减少由于多次转种而带来的染菌机会以及减少因种子罐生长异常而造成的发酵波动 但考虑能否在一定时间内获得优质、足量的种子以满足发酵的需求 种龄 大量地接入培养成熟的菌种的优点： 缩短生长过程的延缓期，因而缩短了 　发酵周期，提高了设备利用率 节约发酵培养的动力消耗 有利于减少染菌机会 接种量 接种量：移入的种子液体积和接种后培养液体的体积的比例 接种量过多，菌丝生长过快、溶氧不足，衰老细胞增加等，发酵后劲不足 种量过少延长发酵周期，形成异常形态，而且易造成染菌。 以生产菌种在发酵罐中的繁殖速度为依据 影响种子质量的因素 原材料质量（ Mg2+、Cu2+、Ba2+ ，磷元素） 培养温度（eg.土霉素生产） 湿度 (eg.土霉素生产) 通气与搅拌 影响种子质量的因素 种子质量的控制措施 菌种稳定性的检查 测定其生产能力，从中挑选高产菌株，并及时对退化菌种进行复壮 提供适宜的生长环境 种子无杂菌检查，保证纯种发酵。 种子制备的放大原理与技术——细菌发酵时的种子扩大培养 细菌发酵过程中种子扩大培养的主要目的是为了获得大量的活力强的种子 ； 种龄对于生芽孢的种子尤其重要。若接种物含大量芽孢，将给后续发酵带来较长迟滞期 酵母发酵时的种子扩大培养 酿酒酵母的扩大培养 最初采用纯种进行酵母发酵并设计出酵母繁殖流程，他将每一步的接种量规定为10％，并控制繁殖条件与酿造时一致 现代的流程中，接种量为1%或更低，控制的条件也与酿造时不同。 丝状真菌发酵的种子扩大培养 丝状真菌既可以利用孢子，也可以 利用菌丝体作为接种物接种到发酵罐进行发酵 在固化的培养基上产生孢子 “滚瓶”技术应用于产黄青霉的孢子生产 在固体培养基上产生孢子 在谷类的颗粒表面形成大量的孢子 在液体深层培养基中产生孢子 丝状真菌的菌丝体作为接种物 不能产生无性孢子的用繁殖体菌丝作为接种物，如生产赤霉素的菌种——藤仓赤霉 问题：难以获得均一的接种物 接种前将菌丝打成碎片，形成大量的菌丝段，它具有大量的生长点 放线菌发酵时的种子扩大培养 斜面培养，制备孢子悬浮液作初级种子 可用培养摇瓶菌丝体作为初级种子 * * 接种龄 种子罐中培养的菌体从开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间 种子培养期应取菌种的对数生长期为宜，菌种过嫩或过老，不但延长发酵周期，而且会降低产量。 放射形土壤杆菌多糖（ARPS） 发酵过程中不同的接种龄对多糖产量的影响 在放射形土壤杆菌多糖（ARPS） 发酵过程中不同的接种量对多糖产量的影响 斜面冷藏时间 (