基于CE-LIF的唾液代谢侧面图谱研究详解.ppt

蒋婷婷 10101570115 郑慧萍 10101570112 研究背景： 含有胺基官能团的有机化合物是一类非常重要的生物分子。这些有机物的定量分析，在食品分析、临床诊断和生物化学等许多领域中起着重要作用特别是氨基酸和生物胺的分析已成为国际研究的一个焦点 。 唾液不仅是一种易得的生物样品，并且能够提高多种生命信息，非常适合大多数疾病的早期检测，包括心血管、肾脏和自身免疫性疾病、病毒和细菌感染、甚至癌症。 在本课题的研究中，我们将中空纤维膜液相微萃取（HF-LPME）技术与CE-LIF相结合，新发展了一种用于氨基化合物分析的HF-LPME/CE-LIF方法。 研究方法： 中空纤维段长度为5 cm。将中空纤维段用丙酮超声波处理1 min，去除纤维的污染物。待溶剂完全蒸发后，将中空纤维用正辛醇浸渍30 s。 用10 μL进样针使空气通过中空纤维的内部，以除去过量的有机溶剂。 注入10 μL 300 mmol/ L的NaOH溶液（接受相），将上述中空纤维膜的一端密封。提取过程的优化，使用统一的标准溶液进行（10.0 nmol/L）。 配8 mL的标准混合溶液（含HCl浓度为 5 mmol/L）在10 mL的烧杯中，将双端密封的中空纤维放入其中，用铝箔覆盖，防止蒸发。然后，将磁力搅拌器接通，以500 rpm的转速提取。 一定萃取时间后，关闭磁力搅拌器，取出中空纤维。将其一端用刀片切断，中空纤维的受体溶液被吸入注射器，用于CE-LIF分析。 基于自组装CE-LIF系统，使用12g/ L PSS / 3 mmol/ L CTAB / 80 mmol/ L Na2B4O7 -NaOH缓冲液（pH12.35）进行电泳分离。 LIF检测器的激发波长为483 nm，发射中心波长为520 nm。所有样品采用电动进样8 s（22 kV）。所有实验均在室温下进行。 研究结果： （一）方法验证 将一系列混合标准溶液（六种分析物，每种含有0.01-5.0 μmol/L）进行测试，以确定线性关系。 （二）应用 分析结果表明： 口腔疾病患者特别是牙龈炎、牙龈癌和口臭患者的唾液中尸胺、腐胺和亚精胺的含量明显高于健康人，同时其前体氨基酸在某些疾病患者的唾液中也有升高。另外，对于健康志愿者的唾液样品而言，刷牙前唾液中的三种生物胺的含量明显高于刷牙后的含量，这表明保持口腔卫生在某种程度上可以有效降低口腔中生物胺的含量。 * 所有唾液样品均保存在-20 ℃。每个解冻的样品通过0.22 mm的尼龙过滤器过滤 在装有500 μL唾液样品的1.5 mL微管中加入500 μL乙腈，充分混合，并离心15 min（10,000 rpm）。 取500 μL样品上清液，加入320 μL FITC（1.0 mmol/L）和180 μL硼酸盐缓冲液（pH=9.23，225 mmol/ L），将反应混合物在室温下避光储存12 h。 考虑到被分析物的衍生效率和FITC响应峰的干扰，FITC 与分析物的衍生比例定为3:1。萃取前，将反应物放于4 ℃冰箱中避光保存。 Aluminum cover Beaker (10 mL) Donor phase (8 mL) Magnetic stirrer Porous hollow fiber impregnated with organic solvent Acceptor phase (10 μL) 动态三相HF-LPME的原理示意图 表1. 六种分析物的回归方程及检测下限和定量限（n=3） 0.88 0.26 19 0.02-5.0 0.9995 y=13.4x+276.5 Orn 0.77 0.23 23 0.02-5.0 0.9983 y=13.4x+299.9 Lys 0.75 0.23 38 0.02-5.0 0.9995 y=6.3x+32.5 Arg 0.43 0.13 63 0.02-5.0 0.9980 y=10.2x+512.4 Spe 0.024 0.0072 218 0.01-5.0 0.9983 y=41.5x+2456.5 Cad 0.057 0.017 112 0.01-5.0 0.9985 y=32.8x+1736.0 Put LOQ (nM) LOD (nM) EFs Linear range (μM) r2 Regression equationb Analytes 结果表明，峰面积和迁移时间的RSD分别为腐胺0.26％，4.64％，尸胺0.28％，4.75％，精氨酸1.28％，4.70％，赖氨酸0.56％，4.64％，鸟氨酸0.63％，4.64％，亚精胺0.69％，4.75％。 0.3 0.6 0.9 1.2 1.5 1.8 2.1 2.4 2.7 2