外周血PBMC的分离(精选).docVIP

PBMC简介 英文全称：peripheral blood mononuclear cell 外周血单个核细胞，指外周血中具有单个核的细胞。 包含淋巴细胞、单核细胞（monocyte）、树突状细胞和其它少量细胞（造血干细胞等）。 PBMC分离方法 外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分层液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。 1.采血，稀释 （外周血：稀释液PBS 1：1） 2.在离心管中加入Ficoll，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血（Ficoll：稀释血 1：1） 3.20℃，1500r/min，离心30min （3） 4. 轻轻吸取PBMC层移入另一试管中 5.加足量稀释液PBS充分洗涤，1800 r/min离心10min ，弃上清。（4） 6.加足量稀释液PBS充分洗涤，1800 r/min离心5min ，弃上清。（2） 7.加冻存液（约1.5ml），分装至3小瓶，每瓶约0.5ml，-80保存 选择转速 3、4、2 注意事项 1.093 外周血 红细胞 粒细胞 单个核细胞 血小板 淋巴细胞 单核细胞 1.030~1.035 1.075~1.090 Ficoll：1.077±0.001 PBMC 1.092 1500rpm, 20℃ , 30min PBMC 红细胞粒细胞 Ficoll 稀释外周血