方法学验证中各项指标的深度剖析2015.ppt

一、线性试验 主成分含量测定 以测定浓度为100% ，50%~120%之间选取5个点即可。 溶出（释放）度测定 以释放量的10%～120%间选取5个点即可。 杂质含量用杂质对照品准确测定 以杂质限度为100% ，50%~120%之间选取5个点即可。 测定结果：1）阐述如何看待截距和斜率、如何应用。2）误差在哪里，应用时的注意事项。3）为什么没有不成线性的？通常C、H、O、N结构，紫外监测器决定。 个别化学键所致。梯度洗脱时，有时会出现不成线性。4）都成线性、为何还要做？最小二乘法的原理知晓。 唑 来 磷 酸 结 构 式 引申使用：1）有关物质测定 归一化法和自身对照法的相互妙用。2）缓释制剂溶出度测定，对照品浓度设定为中间浓度。举例说明。3）回收率试验为何做80%~120%即可？亦及样品浓度与对照品浓度接近到何等程度的理解。4）国内只注重相关系数，不注重截距。 二、精密度试验 重复性试验：连续进样6次。 中间精密度试验和重现性试验通过“耐用性试验中的溶液稳定性试验”来体现。 浓度极低时才会不理想，加大进样量。 色谱峰形极为重要，对称性、柱效等参数。加大柱温、增加流动相中有机相比例，使被测物质峰尽快出峰。 三、准确度试验 用回收率来衡量 作法：在80%~120%间选择3点或5点，原因是由外标一点法决定的。 已知杂质、且有杂质对照品的，可采用加入法，即加样回收率来评价。 一般情况下，只要空白辅料无干扰，回收率均是良好的！ 四、专属性 有关物质为主，其他检测项目（含量）基本上均参照有关物质。 有关物质的验证，采用中间体和降解产物（确认结构后人工合成）来验证与主成分的分离。 系统适用性试验的配制方法： 在100％浓度的主成分溶液中加入1%浓度的杂质对照品，以模拟样品中有可能存在的状态。 介绍配制方法 —— 先配制杂质贮备液，再用供试品溶液（或浓的对照品溶液）来稀释，简便、易行！ 存在问题 —— 配制相同浓度，测定样品时，主成分峰骤然加大，将杂质峰覆盖。 强破坏试验的目的： 验证药品在遭遇了极端的气候环境条件下产生的杂质，在所建立的色谱条件下是否能够分离、测定。 最小峰面积的设定● 其设定，不是绝对值，而是相对值。● 英国药典中有明确的说明：凡有关物质的检测采用HPLC法测定时，均规定舍弃对照溶液主峰面积几分之几的峰面积。普通样品测定时，通常为1/10~ 1/20（即相当于样品测定浓度的0.1%~0.05%）。如规定杂质限度为1.0%，对照溶液峰面积为10000，那么，最小峰面积可考虑设定为1000~500左右。新药稳定性考核时，可设定到0.01%的最小峰面积。● 原料药销售与购买的合同中，为确保双方达成一致意见，此点应予以重视。 强力破坏试验● 水破坏 取原料适量，加水溶解后，在90℃放置24小时。● 氧化破坏 取原料适量，用5%过氧化氢溶液溶解后，在90℃放置24小时。● 强碱破坏 取原料适量，用1mol/L氢氧化钠溶液溶解后，在90℃放置24小时。● 强酸破坏 取原料适量，加1mol/L盐酸溶液溶解后，在90℃放置24小时。● 高温破坏 取原料适量，依据各自品种的熔点不同，在高温下破坏至外观性状改变● 强光破坏 取原料适量，置紫外灯下照射48小时。 四、检测限 ● 信噪比的三倍 —— 纯属“纸上谈兵”，实际测定中根本用不上。● 是相对值，不是绝对值。是相对于供试品溶液浓度的多少分之一而言，一般至少要在5000倍以上。 有关物质、含量与自身对照三者浓度的关系 积分参数的设定 ● 积分参数的设定是非常重要的。由斜率(Slope)、峰宽(Width)、最小峰面积(Min Area)组成。 ● 采用自身对照法时，对照溶液与供试品溶液必须在同一斜率、峰宽下进行积分计算。 ● 供试品溶液最小峰面积的设定将直接导致测定结果。设定得太小，会导致很多小峰甚至是基线漂移的小峰均被积分出作为杂质峰，从而导致杂质峰面积增加，易判断为不合格；如设定得过大，又将反映不出杂质情况。 方法学认证中的耐受性试验 是指更换试验因素，如不同人员、不同仪器，不同色谱柱型号、厂家，不同试剂等因素。这一点才是真正至关重要的！认证时不可能做到这一点，出现问题时往往要考虑到。 方法学认证中溶液稳定性的全面判定 不能单从主成分入手！ 还要注意所有组分的百分比变化，绝对值变化！ 流速、柱温与溶剂的选择 ● 在测定时通常调节流速使主成分保留时间稍长些，且使主成分