梅毒实验室诊断方法.doc

梅毒实验室诊断 梅毒的实验室诊断方法主要有显微镜检查法和血清学检测法。 一、显微镜检查法 （一）暗视野显微镜检查 【基本原理】 梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损的渗出液涂片，以及淋巴结穿刺液涂片等，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。 【仪器材料】 1．暗视野显微镜。 2．钝刀（刮勺）、载玻片、盖玻片、注射器具、无菌生理盐水。 【标本采集】 1．皮肤黏膜组织液：无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀轻刮、挤压皮损表层，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片镜检。 2．淋巴液：无菌操作下穿刺淋巴结，注入生理盐水并反复抽吸2～3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片镜检。 【操作步骤】 1．加镜油：在暗视野显微镜的聚光器上滴加镜油。 2．聚光：将标本玻片置载物台上，上升聚光器使镜油接触载玻片底面。 3．镜检：在镜下观察，寻找有特征形态和运动方式的梅毒螺旋体。 【结果判读】 、告梅毒螺旋体在暗视野显微镜镜下表现为纤细、白色、有折光的螺旋状微生物，长5～20(m，直径小于0.2(m，有6～12个螺旋，具有旋转、蛇行及伸缩等三种特征性的运动方式。暗视野显微镜下发现有上述特征的螺旋体为阳性结果。 【结果报告】 1．阳性：见到上述特征的梅毒螺旋体。 2．阴性：未见到上述特征的梅毒螺旋体。 【临床意义】 1．暗视野显微镜检查阳性,可确诊梅毒。 2．螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最好方法，世界卫生组织指定为性病实验室必备项目之一。 3．如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，应复查和血清学检查。 【注意事项】 取材时尽量避免出血，以免影响镜下观察。 取材后应立即置暗视野显微镜下观察。 镜下观察时应注意与其他螺旋体相鉴别。 （二）镀银染色检查 【基本原理】 梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染色，从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体。 【仪器材料】 1．显微镜。 2．罗吉氏固定液、鞣酸媒染剂、Fontana氏银溶液。 【标本采集】 1. 皮肤黏膜组织液：无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀轻刮、挤压皮损表层，取渗出液涂片。 2．淋巴液：无菌操作下穿刺淋巴结，注入生理盐水并反复抽吸2～3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上。 【操作步骤】 1．涂片干燥：将标本涂于干净载玻片作一薄片，于空气中自然干燥。 2．固定：用固定液将涂片固定2～3分钟。 3．洗涤：用无水乙醇洗涤玻片上的油污。 4．媒染：加媒染剂于涂片上，微加热产生蒸汽，染30秒。 5．银染：水洗，加银染液于涂片上，微加热产生蒸汽，染30秒。 6．镜检：水洗、待干，用油镜检查。 【结果判读】 显微镜下见到染成棕褐色的梅毒螺旋体为阳性结果。 【结果报告】 1．阳性：见到染成棕褐色梅毒螺旋体。 2．阴性：未见到染成棕褐色的梅毒螺旋体。 【临床意义】 同暗视野显微镜检查法。 【注意事项】 应注意与其他螺旋体加以鉴别。 二、血清学检测法 （一）非梅毒螺旋体抗原血清试验 非梅毒螺旋体抗原血清试验，包括性病研究实验室（VDRL）试验、快速血浆反应素（RPR）环状卡片试验、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）等。 VDRL试验 【基本原理】 梅毒螺旋体感染人体后，宿主会产生抗类脂抗原的抗体（反应素），与一定比例的心磷脂、卵磷脂及胆固醇混合物抗原反应，可检测梅毒患者血中的抗类脂抗原的抗体。 【仪器材料】 1. 水平旋转仪、显微镜。 2. 试剂盒：VDRL抗原原液、VDRL缓冲液、抗原滴管及针头、带直径14mm漆圈的玻璃反应板、VDRL试验结果参照图片。 3. 30mL平底玻璃小瓶、生理盐水。 【标本采集】 血清：抽取静脉血，室温静止凝固后，分离新鲜血清。也可采用冻存的血清。 脑脊液：采用腰椎穿刺术获得，应由相关专业人员操作。 【操作步骤】 VDRL抗原配制。 VDRL玻片定性试验 （1）灭活：血清标本56℃灭活30分钟。 （2）吸样：吸取0.05mL血清放入反应板圈中，将血清涂布到整个圈内。 （3）加抗原：用标准针头加入1滴抗原。 （4）反应：将反应板置水平旋转仪上旋转4分钟，〔(180±5)次/分钟〕，立即置低倍显微镜下观察。 3.VDRL定量试验 （1）加稀释液：在圈内加入0.05mL生理盐水（根据需要确定稀释度）。 （2）样本稀释：吸取0.05mL样本与各圈中盐水作系列稀释并涂布整个圈内。 （3）以下步骤同定性试验（2）～（4）。 【结果判读】 凝集反应强度分级： 3＋ ～ 4＋：大的或中等大小的絮状物，液体清亮 2＋：絮状物较小，液体较清亮 1＋：絮状物较小，均匀分布，液体混浊 ±：抗原复合物颗粒稍粗 －：抗原颗粒均匀、细