第一部分细胞传代培养1.一般客户拿到细胞后，应该注意什么客户.docVIP

第部分：细胞传代培养 1.一般客户拿到细胞后，应该注意什么？ 客户收到细胞先不开盖,用酒精将整个细胞瓶外壁进行消毒，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。 2.何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定，常规细胞2-3天更换培养基。 .细胞何时进行传代较好？ 4.?贴壁细胞如何进行传代？ 去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000 rpm/min室温离心5min；弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6， 1:6-1:8），每T25瓶补足培养基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培养。 .?悬浮性细胞应如何传代处理？ 一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000 rpm/min 室温离心5 mi