大理大学病毒学检验备考精华详解.doc

大理大学病毒学检验期末备考精华 责任编辑总结：程家国 第1章 细胞培养技术 一、名词解释 1.细胞培养技术(cell culture technology):是模拟体内生理环境条件，一共细胞适宜的营养和温度条件，在无菌操作的基础上，使离体组织细胞生长增殖并进行传代的技术。 2.细胞系（cell lines）：原代培养物经传代培养获得的一群细胞。 3.原代细胞培养（primary cell）：将动物或人的胎儿组织经剪碎、酶消化、稀释计数、加营养液，37度培养1~2天后，形成单层细胞或悬浮细胞的方法。 4.传代细胞培养（continuous cell）：原代细胞培养过程中，在大多数细胞退化时，少数细胞又能长期传下去，这种能在培养容器内连续多次传代的细胞。 5.细胞株（cell strain）：从原代培养物或细胞系中获得的遗传、生化特性相同的细胞群。 二、问答题 1.简答空斑形成单位法的原理。 答：将不同稀释度的病毒悬液接种于单层细胞上，使病毒吸附于细胞，然后覆盖一层营养琼脂培养基。由于琼脂的限制，病毒只能感染周围的细胞，出现蚀斑现象。加入中性红染料，由于死细胞不能摄入中性红染料，会出现不染色的空斑。一个空斑理论上可认为石油一个病毒粒子感染形成的，称为一个空斑形成单位。可以定量测定病毒的感染力。 2.50%终点法的原理和注意事项。 答：1.原理：将病毒液经系列稀释后，接种单层细胞，观察细胞病变，计算造成50%细胞发生最终病变的病毒液浓度。 2.注意事项： 3.细胞的生命周期和一代生存周期各包括哪些阶段？ 答：1.细胞生命周期：是单个细胞增殖分裂的过程，一个细胞经过前期的物质准备进入分裂期而成为两个新细胞，而两次细胞分裂间间隔的时间为一个细胞周期，包括G1期（DNA合成前期）、S期（DNA合成期）、G2期（分裂前期）、M期（分裂期）。 2.培养一代细胞一般要经过：迟缓期、对数期、平衡期和衰亡期。 4.体外细胞培养需要哪些理化条件？血清有何作用？ 答：1.体外培养需要的条件 5.常用的消化液有哪些？ 答：胰蛋白酶、EDTA、胰酶-EDTA。 6.细胞培养中预防微生物污染可用哪些抗生素？ 答：防止细菌污染用青霉素、链霉素和庆大霉素；防止真菌增长用两性霉素；防止支原体污染用卡那霉素和金霉素。 7.如何进行鸡胚原代细胞培养？ 答： 8.单层细胞培养上病毒增殖如何检测？ 答： 9.病毒滴度测定有哪些方法？ 答： 10.病毒纯化有何原则？ 答： 11.病毒保存的方法有哪些？各有何特点？ 答： 12.常见病毒纯化的方法有哪些？ 第2章 鸡胚和动物接种技术 一、名词解释 1.近交系 2.封闭群 二、问答题 1.鸡胚有哪些结构？分别适合何种病毒的接种培养？ 答：结构： 2.活胚的检查有几个方面？ 3.实验动物如何分类？各有哪些种类？ 答：普通动物、清洁级动物、SPF、GF 第3章 病毒核酸杂交技术 一、名词解释 1.探针（probe）：已知碱基序列的核苷酸片段。 2.cDNA探针：指互补与mRNA的DNA分子。 3.复性（） 4.变性（denaturation）：指核酸双螺旋去的氢键断裂，变成单链，并不涉及共价键的断裂。 5.PCR：聚合酶链反应，根据DNA双螺旋结构的半保留复制和在一定条件下可以变性和复性的特性设计的。 6.Northern blot：Northern印迹，将RNA 样品通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移到固相支持物上，用同位素或生物素标记的核酸探针对固定于膜上的RNA进行杂交。 7.Southern blot 二、问答题 1.简答PCR的原理与反应体系组成。 答：1.原理：根据DNA双螺旋结构的半保留复制和在一定条件下可以变性和复性的特性设计的。 2.反应体系：DNA 模板，引物，反应缓冲液，Mg2+,Dntp,ddH2O,耐热聚合酶。 2.简答荧光定量PCR的用途。 答：可用于测定DNA和RNA拷贝数。 第4章 病毒抗原与抗体检测技术 一、名词解释 1.中和试验（neutralization test）：在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再讲混合物接种到敏感的宿主体内，然后测定残存病毒感染力的一种方法。 2.血凝试验HA：某些病毒和病毒表面的血凝素能引起