专题二 2.2 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体.ppt

* 2．2．2 动物细胞融合与单克隆抗体 动物细胞融合——细胞杂交 1．概念：两个或多个动物细胞结合形成______个细胞的过 程。 2．结果：形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的 ________细胞(杂交细胞)。 一 单核 3．诱导动物细胞融合的过程： 4．意义：克服了________杂交的不亲和性。 DNA 远缘 单克隆抗体 1．传统抗体的获得： (1)方法： ①向动物体内反复注射某种________，使动物产生抗体。 ②从动物__________中分离所需抗体。 (2)特点：产量低、纯度低、抗体特异性________。 抗原 血清 差 2．单克隆抗体的制备： (1)B 淋巴细胞特点： ①一个 B 淋巴细胞只分泌______种特异性抗体。 ②在体外培养条件下，B 淋巴细胞不能无限________。 (2)杂交瘤细胞的特点： ①能产生专一的________。 ②在体外培养的条件下，可迅速大量繁殖。 一 增殖 抗体 3．单克隆抗体的应用前景： (1)作为诊断试剂。 (2)用于治疗疾病和________药物。 运载 动物细胞融合技术 1．杂交细胞的形成需要人工诱导： (1)用紫外线灭活的仙台病毒诱导融合。 (2)聚乙二醇(吸水性强、能凝聚和沉淀蛋白质)诱导融合。 (3)电激诱导融合。 2．用灭活病毒诱导动物细胞融合的过程图： 3．融合的细胞：融合的细胞要繁殖就要进行动物细胞的培 养，通过动物细胞的培养，杂交细胞表现出两个亲本各自的优 良特点。 培育新品种 制备单克隆抗体、病毒疫苗、干 扰素等 用途 获取杂种植株 获得杂种细胞，以生产细胞产品 结果 离心、电刺激、振动、显微操作、 聚乙二醇等诱导 与植物体细胞杂交相比，还可用 灭活的病毒诱导 诱导 手段 用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁 后诱导原生质体融合 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细 胞分散后，诱导细胞融合 方法 细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性 原理 植物体细胞杂交 动物细胞融合 4．动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较： 单克隆抗体的制备 1．单克隆抗体的制备过程： (1)抗原制备。 (2)免疫动物。 (3)B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞的制备。 (4)细胞融合。 (5)杂交瘤细胞的选择培养。 (6)杂交瘤细胞的筛选。 (7)杂交瘤细胞的克隆化。 (8)单克隆抗体的检验。 (9)分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立。 (10)单克隆抗体的大量制备。 2．整个制备过程中要经过两次筛选： (1)第一次筛选是为了得到杂交瘤细胞(去掉未杂交的细胞 及自身融合的细胞)。 (2)第二次是为了筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于 该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆来的，所以产生的抗体必然是 化学性质单一、特异性强的单克隆抗体。 3．单克隆抗体技术的最主要优点：可以用不纯的抗原分子 制备纯化的单克隆抗体，甚至是所需抗原的单克隆抗体，其原 因是可以在产生各种不同抗体的各种杂交瘤混合群体中筛选出 产生特异抗体的杂交瘤。 4．单克隆抗体的应用： (1)单克隆抗体可以作为诊断试剂，准确识别各种抗原物 质，与抗原的特异性结合具有准确、高效、简易、快速的特点。 (2)单克隆抗体还可以用于治疗疾病和运载药物：主要用于 治疗癌症。单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物 导弹”，准确杀伤癌变细胞。 动物细胞融合 ) 【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是( A．离心 B．灭活的病毒 C．电刺激 D．振动 【名师点拨】在体外培养条件下，动物细胞会自发融合， 但是频率很低。因此，一般都需要添加具有诱导细胞融合效应 的生物药剂或化学药剂，或者采用电融合技术，人为地促进细 胞融合。常用的动物细胞融合的诱导因子是聚乙二醇和灭活的 病毒。其中聚乙二醇既可用于促进植物原生质融合，又可用于 促进动物原生质体融合。而灭活的病毒只能用于促进动物细胞 的融合，如灭活的仙台病毒是最常用的诱导因子，其诱导原理 是因为病毒具有侵染细胞的能力，优点是融合率高，对各种动 物细胞都适用。 【答案】B 【配对练习1】(2012年佛山联考)动植物细胞融合过程的 最重要的区别是( ) A．细胞融合过程 B．人工诱导细胞融合的方法 C．植物细胞必须先用酶除去细胞壁 D．电融合技术 【答案】C 单克隆抗体的制备 【例2】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验 步骤中错误的是( ) A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的 B 淋巴细胞 B．用纤维素酶处理 T 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞 C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的 B 淋巴细胞 与小鼠骨髓瘤细胞融合