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（1）分光光度法（spectrophotometry）：多利用产物在紫外或可见光部分的光吸收性质，选择适当波长，测定反应过程的进行情况。简便、节约时间和样品，可以检测nmol/L水平的变化。 （2）荧光法(fluorometry)：主要利用底物或产物的荧光性质。灵敏度高，但易受到干扰。 （3）同位素测定法：同位素标记底物，反应后经分离，检测产物的脉冲数，即可换算成酶的活力单位。灵敏度最高。 （4）电化学方法：pH计、 氧电极法 （二）酶的分离和纯化 酶的分离提纯方法，也就是常用来分离提纯蛋白质的方法。 （1）把很大体积的酶制剂浓缩到较小体积; （2）把酶制剂中大量的杂质蛋白和其它大分子物质分离出去。 判断分离提纯方法的优劣，用总活力的回收和比活力提高的倍数来衡量。 过程：①选材；②破碎；③抽提；④分离及纯化；⑤结晶；⑥保存。 六、核 酶(ribozyme) *Ribozyme是一种RNA生物催化剂 Ribozyme的发现：RNA具有酶的催化功能是由Cech T.R于1982年提出的。1981年，发现四膜虫（tetrahymena thermophila）的26S rRNA前体在成熟过程中，其居间序列通过剪接反应被除去。并证明四膜虫rRNA前体的居间序列核糖核酸（L-19RNA）具有多种催化功能，将这种具有催化活性的RNA称为 Ribozyme (ribonucleic acid enzyme)。获得1989年诺贝尔化学奖。 * * 第8章 酶通论 一、酶催化作用的特点 二、酶的化学本质及其组成 三、酶的命名和分类 四、酶的专一性 五、酶的活力测定和分离纯化 六、核酶 七、抗体酶 八、酶工程简介 一、酶催化作用的特点 酶是一类具有高效率、高度专一性、活性可调节的高分子生物催化剂。 1857 Pasteur提出酒精发酵是酵母细胞活动的结果。 1897??Buchner兄弟证明发酵与细胞的活动无关，不含细胞的酵母汁也能进行乙醇发酵。 1913??Michaelis和Menten提出米氏方程。 1926??Sumner首次从刀豆中提出脲酶结晶，并证明具有蛋白质性质。 1969??Merrifield人工合成核糖核酸酶。 1967-1970??从E.coli中发现第I、第II类限制性核酸内切酶。 1982??Cech和Altman发现四膜虫细胞大核期间26S?rRNA前体具有自我剪接功能。 Schultz与Lerner研制成功抗体酶。 Boyer和Wakler阐明ATP合成酶合成与分解ATP的分子机制。 （一）酶和一般催化剂的比较 酶与非生物催化剂相比的几点共性： ①催化效率高，用量少（细胞中含量低）。 ②加快反应速度但不改变化学反应平衡点。 ③降低反应活化能。 ④反应前后自身结构不变。 催化剂改变了化学反应的途径，使反应通过一条活化能比原途径低的途径进行，催化剂的效应只反映在动力学上（反应速度），不影响反应的热力学（化学平衡）。 （二）酶作为生物催化剂的特点 酶的催化作用可使反应速度提高10７ –101３倍。 例如：过氧化氢分解 2H2O2 ? 2H2O + O2 用Fe3+ 催化，效率为6×10-4 mol/mol·S，而用过氧化氢酶催化，效率为6×106 mol/mol·S。 转换数（turnover number）的概念：每秒钟每个酶分子能催化底物发生变化的微摩尔数，用kcat表示（ ?mol/S ）。 ?-淀粉酶催化淀粉水解，1克结晶酶在65?C条件下可催化2吨淀粉水解。 1．高效性（酶具有极高的催化效率） 2．专一性 Specificity 酶的专一性 Specificity又称为特异性，是指酶在催化生化反应时对底物的选择性，即一种酶只能作用于某一类或某一种特定的物质。亦即酶只能催化某一类或某一种化学反应。 　例如：蛋白酶催化蛋白质的水解；淀粉酶催化淀粉的水解；核酸酶催化核酸的水解。 3．反应条件温和 酶促反应一般在pH 5-8 水溶液中进行，反应温度范围为20-40?C。 高温或其它苛刻的物理或化学条件，将引起酶的失活。 ４．酶易失活 凡能使蛋白质变性的因素如强酸、强碱、高温等条件都能使酶破坏而完全失去活性。所以酶作用一般都要求比较温和的条件如常温、常压和接近中性的酸碱度。 ５.酶活力可调节控制 如抑制剂调节、共价修饰调节、反馈调节、酶原激活及激素控制等。 ６.某些酶催化活力与辅酶、辅基及金属离子有关。 （二）酶作为生物催化剂的特点（小结） （1）?催化效率高：酶催化反应速度是相应的无催化反应的108-1020倍，并且至少高出非酶催化反应速度几个数量级。 （2）专一性强：酶对反应的底物和产物都有极高的专一性，几乎没有副反应发生。 （3）反应条件温和：温度低于100℃，正