上海交通大学遗传学下午5组果蝇杂交实验方案.pptx

果蝇杂交实验方案 陈宇冲 伦敏翔 王 丰 1.实验的目的：1.1验证基因伴性遗传的规律1.2验证基因连锁与交换规律并计算重组值 2.实验材料、实验原理： 2.1黑腹果蝇（Drosophila melanogaster） 2.2 黑腹果蝇生活史 2.实验材料、实验原理： 2.3黑腹果蝇的饲养方法 ①果蝇饲料的配制： 果蝇是以酵母菌作为主要食料的，因此实验室凡能发酵基质，都可用作果蝇饲料。常用的饲料有玉米饲料、米粉饲料、香蕉饲料等。配方如下。 2.实验材料、实验原理： ②果蝇的饲养 果蝇的培养温度以25℃左右为宜。湿度可根据培养基不同时期的状况调整, 当发现培养基比较干燥时,可以用大的培养皿盛满水敞口放入培养箱中,调整箱内湿度;每天光照9h为宜;培养基3周左右更换一次。果蝇的正常可生存温度在12℃ ～ 32℃。25℃是果蝇生长发育和繁殖最适的温度。在18℃时果蝇的生长发育和繁殖速度会明显减慢,但果蝇会明显变得肥壮,通常是用这个温度进行果蝇的保种。过高或过低都会造成果蝇的死亡。 2.3研究的性状及显隐性 伴随性染色体的遗传现象称为伴性遗传。果蝇的性染色体有X和Y两种，雌蝇为XX；雄蝇为XY。位于性染色体上的基因其传递方式与常染色体上的基因不同，他们的遗传方式与雌雄性别有密切关系。与复眼色素有关的基因在X染色体上，通过野生型（红眼）与突变（白眼）杂交，经过F1和F2子代可以观察到伴性遗传现象。用雌性白眼果蝇和雄性红眼果蝇杂交，在子一代可以观察到雌性都成了红眼，而雄性都是白眼，此现象又称交叉遗传。子一代相互交配得子二代，雌性果蝇的红眼与白眼比例为1:1，雄的红眼与白眼比例也是1:1。 2.实验材料、实验原理： 连锁与交换验证实验将白眼、小翅、刚卷毛（wmsn/wmsn）的三隐性突变体雌果蝇与红眼、长翅、直刚（+++/Y）毛野生型雄果蝇杂交，F1代可产生三杂合体雌果蝇和三隐性雄果蝇（wmsn/+++）。由于F1代雄果蝇的Y染色体上不携带相应的等位基因，因而表现出X染色体上三个隐形基因所控制的性状，故相当于一个隐性纯合体。将F1代的三杂合体雌果蝇（wmsn/+++）与三隐性雄果蝇（wmsn/Y）测交，通过统计测交后代中各种表型果蝇的个体数，就可以估计出各基因之间的交换值，判断出基因之间的相互顺序，绘制出连锁遗传图。 3.实验技术流程 4.实验的步骤 4.1亲本的纯种培养 4.1.1 亲本饲养瓶的准备 4.1.2 果蝇的麻醉与转瓶 第一天，将两个品系的雌雄果蝇麻醉后进行挑选，其中在野生型中挑出3-4对，突变型中挑出7-8对，分别培养，25°C培养8天 4.实验的步骤 4.2杂交1（伴性遗传的观察） 4.2.1 杂交用饲养瓶的准备 4.2.2亲本处女蝇的挑选 第八天，19：00，待培养瓶中出现蛹并且呈黑色时，将两个品系的亲代果蝇麻醉弃去。野生型品系继续培养，待用。 第九天，7：00，将孵化的突变型成蝇麻醉后分出雌蝇，至另一培养瓶，培养处女蝇待用。19：00，继续挑选雌果蝇，放入处女蝇培养瓶中，以后每隔12小时挑选一次，直至挑出10只处女果蝇。 4.2.3 雄性果蝇的挑选 麻醉野生型品系，挑出10只雄果蝇，放入突变处女蝇培养瓶中，杂交25°C培养。杂交组合为：突变型（雌）×野生型（雄） 4.2.4 F1代生长情况的观察 4.2.5 F1代性状的观察记录及统计 杂交果蝇培养8天以后，将亲代果蝇麻醉弃去。观察新长出的子一代果蝇性状，并记录。 4.实验的步骤 4.3 杂交2（伴性遗传的进一步观察） 4.3.1 杂交用饲养瓶的准备 4.3.2杂交亲本的挑选与转瓶 子一代瓶中收集30对果蝇（不必再挑处女蝇），转移至3个新的培养瓶中，每瓶10对，25°C继续培养。 4.3.3 F2代生长情况的观察 观察3个培养瓶中子二代在孵化前的生长状况 4.3.4 F2代性状的观察记录及统计 8天以后，麻醉子一代果蝇，弃去。新生长的果蝇是子二代果蝇，观察性状并记录。 4.实验的步骤 4.4 杂交3（连锁与交换的观察） 4.4.1 杂交用饲养瓶的准备 4.4.2杂交亲本的挑选与转瓶 子一代瓶中收集30对果蝇（不必再挑处女蝇），转移至3个新的培养瓶中，每瓶10对，25°C继续培养。 4.4.3 F2代生长情况的观察 观察3个培养瓶中子二代在孵化前的生长状况 4.4.4 F2代性状的观察记录及统计 8天以后，麻醉子一代果蝇，弃去。新生长的果蝇是子二代果蝇，观察性状并记录。 最后观察子二代性状，要求每组观察100只。 5．实验的结果与分析 5.1 果蝇的饲养及出现的问题 5.2杂交1，基因伴性遗传观察的结果与分析 统计日期观察结果 各类果蝇的数目 ♂红眼 ♂白眼 其它 5．实验的结果与分析 5.3