十五章 第二节后回顾.pptVIP

回顾 1、请简述乙肝病毒的结构。 2、乙肝疫苗的种类和在酵母中制备乙肝疫苗的方法。 乙肝病毒结构 乙肝疫苗的种类 血源性疫苗 重组蛋白疫苗 多肽疫苗 核酸疫苗 2、通过重组大肠杆菌表达治疗性蛋白质常见的方法有哪几种，各有何优缺点？ （1）非融合表达 （2）融合表达 （3）分泌表达 2、通过重组大肠杆菌表达治疗性蛋白质常见的方法有哪几种，各有何优缺点？ * 1. HBV形态结构 大球形颗粒（Dane颗粒） 小球形颗粒 管形颗粒 100-1000 nm 直径为42nm的大球形颗粒形态 （完整的病毒，具有传染性） HBsAg HBcAg HBV DNA DNA P （外膜蛋白） （核衣壳蛋白） 大球形 蛋白 管形蛋白 小球形 蛋白 名称 \ \ 5% 主组分 22nm 基因组DNA HBsAg 形态 LP MP SP（Main） 双联环状DNA 20% 5-10% 主组分 42nm \ 5-10% 2-5% 主组分 22nm、100-1000 nm 以HBV GD 为模板 上游工艺 上游工艺：1、扩增HBV S基因；2、插入克隆载体；3、转化原核工程菌测序、提取质粒；4、经酶切，连接，将HBV S基因插入表达载体；5、转化酵母细胞；6、筛选阳性克隆 ［预处理、粗提］ 乙肝疫苗制备 破碎酿酒酵母，除去细胞碎片;硅胶吸附粗提HBsAg ［稀释、除菌］ 疏水色谱纯化，硫氰酸盐处理，稀释和过滤除菌 ［检定、甲醛处理］ 无菌检查、蛋白含量测定、100 μg/ml 甲醛，37℃保温 ［铝吸附］ ［铝佐剂］ ［检定、分批、分装和包装］ 成品 半成品 原液 发酵液 粗提液 2-8 ℃低温 铝吸附产物 ［检定] * （1）非融合表达 * （2）融合表达 且用凝血酶可将目的蛋白的GST标签切掉，便于下游蛋白纯化 * （3）分泌表达 目的基因嵌合在信号肽下游进行表达 细胞周质和培养基中，减少代谢负荷，有利于形成天然构象的活性产物。 表达量低；分泌不到特定位置 天然构象的蛋白质；表达到周质或培养基中；降低代谢负担 分泌表达 细胞内蛋白 高效表达 融合表达 包涵体、复杂的变性、复性（复性率低） 结构、功能和免疫原性与目的蛋白类似 非融合表达 缺点 优点 名称 *