荧光共振能量转移(FERT)资料.ppt

荧光共振能量转移技术 fluorescence resonance energy transfer (FRET) 概念 当供体荧光分子（荧光基团）的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠，并且两个分子的距离在10nm范围以内时，就会发生一种非放射性的能量转移，即FRET现象，使得供体的荧光强度比它单独存在时要低的多（荧光猝灭），而受体发射的荧光却大大增强（敏化荧光）。 CFP Ex. 440nm Ex. 470nm Em. 470nm YFP Em. 535nm 荧光共振能量转移(FRET)现象 3. FRET现象的特征: 选择性激发供体,却能检测到受体发射的荧光 1. 供体(Donor, D) Donor 2. 受体(Acceptor, A) Acceptor FRET 原理(Principle) FRET应用 分子定位研究 大分子在细胞内的弥散过程和运输过程研究 蛋白质构象改变研究 分子与分子间相互作用研究 分子合成和降解过程研究 酶活性检测方面 Laser Laser D A FRET技术应用一:检测两个发光分子间的重合与共定位 FRET技术应用二: 检测分子间的相互作用 Laser 荧光标记利用FRET技术检测不发光分子间相互作用的策略 Laser FRET技术应用三: 检测分子的折叠与构象变化 FRET技术应用四：细胞内钙离子浓度的实时测量 Miyawaki A,