山奈酚抑制BaP致HTR8SVneo细胞氧化损伤研究.pdfVIP

中文摘要 山奈酚抑制BaP致HTR8．SVneo细胞氯化损伤的研究 摘 要 多环芳烃是常见的空气污染物，主要来源于烟草烟雾、煤炭燃烧、汽 车尾气和室内烹调油烟，易在水体、土壤和作物中残留蓄积【l】。苯并(a) 芘(BaP)是多环芳烃中最具代表性的环境有机污染物。流行病学调查和动 物实验表明，苯并(a)芘和不良妊娠结局的发生有关，如流产、早产、 胎儿生长受限及出生缺陷等，还与生育能力下降和不孕不育有关【2-51，其 可能的作用机制包括影响细胞色素P450酶的代谢、氧化损伤、细胞凋亡、 参与DNA损伤及其抗雌激素效应等【6。11。 山奈酚(Kaempfer01)属于黄酮类化合物，黄色针状结晶，为木贼科的 特征性成分，还存在于姜科植物山柰和小檗科植物窝儿七的根茎，大戟科 植物猫眼草的地上部分，在水果、蔬菜、豆类、茶叶中也大量存在。已有 研究发现山奈酚有多种生物学功能如抗氧化、抗炎、抑制肿瘤生长、抑制 血小板聚集和粘附作用、抗菌、保护肝细胞等药理作用D2-18】。山奈酚的抗 氧化途径主要有：清除自由基(ROS)，通过调节NOS(一氧化氮合酶) ／NO(一氧化氮)水平来抑制ROS的产生，抑制脂质过氧化(丙二醛MDA)， 增强抗氧化酶活性(超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化物酶 GSH-Px)，抑制低密度脂蛋白的氧化损伤，抑制线粒体膜电位降低和细胞 色素C的释放，影响核转录因子I(B呷．I(B)信号通路等119-21】。但山奈酚在 空气污染物致胚胎损伤的防护作用研究尚未见报道。本实验构建了苯并芘 损伤人绒毛膜外滋养层细胞HTR8．SVneo模型，探讨山奈酚预防BaP造 成阳限8．SVneo细胞氧化损伤的研究。 目的：探讨山奈酚预防BaP造成HTR8．SVneo细胞的氧化损伤，并 初步研究其作用机制。 力法： 1构建BaP损伤模型：MTT法测定O．1～50“mo儿苯并芘分别作用 24小时和48小时的细胞生存率。选取细胞生存率在30％左右的作用浓度 和时间。 中文摘要 2实验设计分组：对照组、BaP染毒组、BaP染毒+不同浓度的山奈 酚(O．01l上mol／L ll,tmol／L)组。 3采用比色法分别测定各实验组中SOD(超氧化物歧化酶)、MDA(丙 二醛)及NO(一氧化氮)的含量。 4采用Giemsa染色和Hochest33342染色观察细胞凋亡形态学的改 变；采用流式细胞术观察各组细胞凋亡率。 5采用RT-PCR法测定各组caspase．3、iNOS、AhR mRNA的变化。 结果： l山奈酚对BaP损伤的保护作用 研究发现O．1--501．tmol／L BaP作用24和48小时均可使细胞生存率下 降，且细胞生存率随着苯并芘作用浓度的加大和作用时间的延长而下降。 根据染毒强度和细胞生存率，选定细胞抑制率在30％作用，染毒强度为 10pmol／L作用48小时构建BaP损伤模型。结果表明山奈酚可抑制BaP 造成HTR8．SVneo细胞的损伤，与BaP染毒组相比，差异有统计学意义。 2山奈酚对BaP损伤模型SOD、MDA及NO水平的影响 实验结果显示山奈酚可升高BaP损伤模型细胞培养液中的SOD活性， 降t氐MDA及NO的含量，与BaD染毒组相比，差异有统计学意义。 3山奈酚对BaP损伤模型中细胞凋亡情况的影响 实验结果观察到BaP损伤模型中发生细胞凋亡时的形态学改变；山奈 酚可降低BaP损伤模型细胞凋亡率，与BaF染毒组相比，差异有统计学意 义。 4山奈酚对BaF损伤模型中caSpaSe．3、iNOS、AhR mRNA的影响 结果表明山奈酚可降低BaP损伤模型中caSpaSe．3、iNOS、AhR mRNA 的表达，与BaP染毒组相比，差异有统计学意义。 中文掖要 结论： 山奈酚在体外可以抑制BaP致HTR8．SVneo细胞的氧化损伤，通过 提高抗氧化酶SOD活性，降低脂质过氧化物MDA、NO的产生来减少 BaP损伤模型中凋亡的发生，可有效的抑制BaP损伤。山奈酚降低了BaP 损伤模型中凋亡基因及芳香烃受体基因的表达。 因此，我们认为山奈酚对苯并芘造成的人绒毛膜外滋养层细胞氧化 损伤具有一定的保护作用，这将为山奈酚被开发为一个高效的BaP防护 剂奠定理论基础。 关键词：山奈酚；氧化损伤；凋亡；苯并(a)芘；胚胎；绒毛膜外 滋养层细胞 Protective effect ofKaempferoi against oxidative damage of extravillous trophoblast cell line caused by BaP ABSTRACT PAHs are common air pollutants，mainly from tobacco smoke，coal burning，vehicle exhaust and