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反胶团萃取的原理 本质仍是液-液溶剂萃取过程 AOT——琥珀酸酯磺酸钠 反胶束的溶解作用 微水池溶解和分离作用 反胶团的微水池的水可溶解氨基酸、肽和蛋白质等生物分子, 为生物分子提供易于生存的亲水微环境. 因此,反胶团萃取可用于氨基酸、肽和蛋白质等生物分子的分离纯化，特别是蛋白质类生物大分子。 反胶团萃取的溶解推动力 A 静电作用： 反胶团萃取通常采用离子型表面活性剂，如AOT（阴离子型S）、CTABTOMAC（阳离子型S） 当水相pH值偏离蛋白质的pI时，理论上,当溶质所带电荷与表面活性剂相反时,由于静电引力的作用,溶质易溶于反胶团,溶解率或分配系数较大,反之,则不能溶解到反胶团相中, 左图为pH值对不同蛋白质在AOT反胶团中溶解率的影响 当pHpI时,即在带正电荷的pH范围内蛋白质的溶解率接近100%,说明静电相互作用对蛋白质的反胶团萃取起决定性作用。 B 空间相互作用 空间相互作用主要表现为反胶团与蛋白质的相对尺寸； 在蛋白的等电点 (排除了静电相互作用的影响)，反胶团萃取实验研究表明:随着蛋白分子量的增大，蛋白质在反胶团相的溶解率下降。当M 20KD时,溶解率很小. 表明随M增大, 空间排阻作用增大, 蛋白的溶解率降低； 因此，可根据蛋白分子之间相对分子质量的差别进行反胶团萃取分离 C 疏水性相互作用 氨基酸或多肽的分配系数随其疏水性的增大而增大。蛋白质的疏水性影响其在反胶团中的溶解形式,因而影响其分配系数。疏水性较大的蛋白可能以“半岛式”形式溶解。 反胶团萃取的影响因素 蛋白质在反胶团相的分配平衡主要取决于蛋白质分子与表面活性剂的静电相互作用、疏水相互作用和反胶团的空间排阻作用。 盐种类浓度 盐浓度增加或不同的盐种类对反胶团相产生脱水效应，反胶团的含水率W0随盐浓度的增大而降低，反胶团直径减小，空间排阻作用增大，蛋白质的溶解率下降 有机溶剂助溶剂 有机溶剂及助溶剂可影响反胶团的尺寸 添加助溶剂的作用：1. 降低表面活性剂亲水头部离子间的相互排斥作用，促进反胶团形成；2.促使亲水性较强的表面活性剂溶于有机相。常见的助溶剂有己醇和辛醇等。 表面活性剂种类和浓度 种类：S的种类决定是否能在有机相中形成反胶团，或反胶团是否足够大 浓度：随着S浓度的增加，形成的反胶团数量增加，因此，反胶团相的萃取容量或相间分配系数增加 反胶团萃取的存在问题 反胶束萃取中的蛋白质变性问题（很多蛋白质与表面活性剂接触后，容易变性失活）：开发新型表面活性剂（如弱离子或非离子型表面活性剂） 反萃取主要调节pH值、盐种类和浓度，一般反萃取的速率比萃取速率要慢。 生物分离工程 第四章 萃取（extraction） 第二讲 反胶团萃取 Reversed MicellarExtraction 基本概念 反胶团萃取的定义 利用表面活性剂在有机相中形成的反胶团，使生物分子从水相中进入到有机相中反胶团内的微水环境中，进而实现分离的过程 反胶团萃取的本质仍是液液有机溶剂萃取 反胶团萃取 反萃取 水相中的溶质进入反胶团需经历三步传质过程： 1、通过表面液膜扩散，从水相到达相界面； 2、在界面处溶质与表面活性剂作用进入到反胶团中； 3、含有溶质的反胶团扩散进入有机相 反萃取过程与萃取过程相似，但方向相反 1 2 3 表面活性剂胶束 表面活性剂 （Surfactant） 胶束（micelle） cross section 胶束(micelles): 向水中加入表面活性剂，水溶液的表面张力随[S]增大而下降。当[S]达到一定值后，S将发生缔合或自组装（molecular self-assembly），形成水溶性胶束, 溶液的表面张力不再随表面活性剂浓度的增大而降低 临界胶束浓度(critical micelle concentration,CMC): 表面活性剂在水溶剂中形成胶束的最低浓度 有机溶剂中的反胶团 胶束和反胶束的形成都是表面活性剂分子自聚集的结果，是热力学稳定的系统。 反胶团（reversed micelle） Cross section 反胶团(reverse micelles): 若向有机溶剂（油）中加入油溶性表面活性剂，当[S]超过一定值时，S在有机溶剂中也会形成胶团。通常将S在有机溶剂中形成的胶团称为反胶团，也称反胶束或反微团 胶团和反胶团的形状 Reverse micelles micelles 表面活性剂分子的聚集使反胶团内形成极性核(polar core)，因此有机溶剂中的反胶团可溶解水。反胶束内溶解的水通常称为微水相或“水池”(water pool) M，ρ-水分子质量和密度； asurf-界面处一个表面活性剂分子的面积。离子型表面活性剂在室温下