6基因工程及其他育种方法.ppt

２、基因的针线──DNA连接酶 （1）连接的部位： 3.种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。 1.（2008上海高考生物巻）以重组DNA技术为核心的基因工程正在改变着人类的生活。请回答下列问题。 （1）获得目的基因的方法通常包括 和 。 （2）切割和连接DNA分子所使用的酶分别是 和 。 （3）运送目的基因进入受体细胞的载体一般选用病毒或 ，后者的形状成 。 （4）由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率 ，所以在转化后通常需要进行 操作。 （5）将人胰岛素基因分别导入大肠杆菌与酵母菌，从两者中生产的胰岛素在功能和 序列上是相同的。 基因工程及五种育种方法 复习要点： 1.基因工程的概念、工具（剪刀、针线、运载体）、过程、应用 2.五种育种方法的原理、优缺点对比 3.根据育种目的选择合适的育种方法 一、 基因工程概念 基因工程 概念 工具 过程 应用 又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的 说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基 因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生 物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 获得人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 实质 基因重组 基因工程的基本内容 基因工程 基本步骤 基因工程的工具 限制性内切酶 DNA连接酶 运载体 2.目的基因与运载体结合 4.目的基因的检测和表达 3.将目的基因导入受体细胞 1.提取目的基因 二 基因操作的工具 １、基因的剪刀──限制性核酸内切酶（限制酶） 　（2）特点：一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA 分子切断。 （1）指一类酶，非一种酶。 基因工程 概念 工具 过程 应用 （3）作用部位： 磷酸二酯键 （4）作用结果： 形成黏性末端 重播 思考：要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 切两个切口，就会产生四个黏性末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就可以合成重组的DNA分子了。 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 模板 作用部位 化学本质 DNA连接酶 DNA聚合酶 （2）结果： DNA双链片段间的磷酸二酯键，不是氢键。 （3）与DNA聚合酶的异同 蛋白质 蛋白质 单个脱氧核苷酸+片段 磷酸二酯键 磷酸二酯键 DNA片段+DNA片段 需要（DNA一条链） 不需要 形成重组DNA 3、基因的运输工具——运载体 1.作用：将外源基因送入受体细胞。 2.条件： 能在宿主细胞内自主复制并稳定地保存。 具有一个至多个限制酶切点，使外源基因插入其中。 具有某些标记基因，以便进行筛选。 如抗菌素抗性基因、产物具有颜色反应的基因 4）对受体细胞无害，不影响其正常活动。 3、基因的运输工具——运载体 常用的运载体： 质粒、噬菌体和动植物病毒等 标记基因，便于进行检测。 质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子.　 四个基本步骤： 三 基因操作的基本步骤 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测和表达 基因工程 概念 工具 过程 应用 2.目的基因的提取方法 直接分离基因 人工合成基因 反转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA ：鸟枪法（从基因文库中获取） 1.目的基因: 人们所需要转移的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 目的基因的mRNA 单链DNA(cDNA) 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 目的基因的扩增： PCR技术 （一）提取目的基因 质粒 DNA分子 同一种限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 三种情况：目的基因与目的基因结合