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第十章蛋白质复性包含体：重组蛋白质的高效表达常常导致其在胞内发生错误折叠和聚集，形成被称为包含体的聚集体。包含体主要有蛋白质构成，其中大部分是基因表达产物。蛋白质的复性：变性蛋白质溶解在高浓度变性剂中，降低变性剂浓度至非变性浓度范围即可引发蛋白质折叠复性。结晶——有序沉淀——无序第九章电泳和电色谱电泳：是荷电溶质（电解质）或粒子在电场作用下发生定向泳动的现象。分类：依据电泳原理，现有三种形式的电泳分离系统移动界面电泳（moving boundary electrophoresis）区带电泳（zone electrophoresis ）稳态电泳（steady state electrophoresis ）其中区带电泳是目前常用的电泳系统。分子筛效应：在使用凝胶介质的电泳中，由于电泳介质具有高粘度和高的摩擦阻力，因此不仅可以防止对流，而且可以把扩散减到最小。凝胶中的大分子分离取决于它的电荷、尺寸和形状。凝胶的这种用于分离不同尺寸分子的特性是由于它的尺寸筛分能力（Size sieving capacity），这种现象被称为分子筛效应（molecular sieving effect）图中A，B，C均为阳离子，在直流电场作用下电泳情况示意图分子量大小依次为MA=MBMC，所带电荷量相同QA=QB=QC。SDS的原理：蛋白质分子的解聚，SDS是一种阴离子去污剂，作为变性剂和助溶性试剂，能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白质分子的二级、三级结构；而强还原剂，如二硫苏糖醇、β-巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。第八章亲和色谱本质：蛋白质表面存在一些凹陷或凸起结构，恰好能使某些小分子进入到其中，形成构象上的钥匙-锁关系。亲和作用不仅依靠结构上相似性，还需要多种力的相互作用亲和作用中的相互作用力：静电作用氢键疏水性相互作用配位键弱共价键影响亲和作用的因素：离子强度：亲和作用主要源于静电引力，提高离子强度会减弱或完全破坏亲和作用；提高离子强度也会降低或消除氢键作用；当亲和结合作用主要源于疏水性相互作用，增大离子强度则可提高亲和结合作用；pH：作为两性电解质的蛋白质含有多个解离基团，不同解离基团具有不同的解离常数；如果静电引力对亲和结合作用贡献较大，pH值会严重影响亲和作用，即适当的pH值下亲和结合作用较高，而在其他pH值下亲和结合作用减弱直至消失；抑制氢键形成的物质：如果亲和结合作用中存在氢键，则加入脲或盐酸胍可减弱亲和作用。温度：温度升高使分子和原子间热运动加剧，减弱静电作用、氢键和配位键；增强疏水性相互作用离液离子螯合剂：如果亲和作用源于亲和分子与金属离子形成的配位键，加入乙二胺四乙酸等螯合剂除去金属离子会使亲和作用消失亲和纯化定义：将具有亲和作用的两种分子中的一种分子与固体粒子或可溶性物质共价偶联，可特异性吸附或结合另一种分子，使另一种分子从混合物中得到选择性分离纯化的方法称为亲和纯化。在亲和纯化中，一般将亲和作用分子对中被固定的分子称为亲和结合对象的配基。亲和配基：酶的抑制剂、抗体、蛋白A（或称A蛋白）、凝集素、辅酶和磷酸酰苷、三嗪类色素、过渡金属离子、组氨酸、肝素亲和配基的固定化方法：介质的活化方法：溴化氰法、环氧基法、羰基二亚胺法间隔臂的作用：当配基分子量较小时，为了排除空间位阻作用，需要在配基和载体之间连接一个“间隔臂”，间隔臂的长度有一定限制，超过一定长度后，配基与目标分子的亲和力会减弱影响亲和吸附的因素：杂质的影响：料液中目标产物浓度很低，杂质很多，少量杂质的非特异性吸附，会大大降低纯化效果。杂质的非特异性吸附量与其浓度、性质、载体材料、配基固定化方法等众多因素相关料液流速：流速的增大，分离速度加快，但柱效降低目标产物的特异性洗脱：特异性洗脱利用含有与亲和配基或目标产物具有亲和结合作用的小分子化合物为洗脱剂，通过与亲和配基或目标产物的竞争性结合，脱附目标产物。特异性洗脱条件温和，有利于保护目标产物的生物活性，提高目标产物的纯度。目标产物的非特异性洗脱：非特异性洗脱是提高洗脱液的pH值、离子强度、离子种类或温度等理化性质降低目标产物的亲和吸附作用，是较多采用的洗脱方法。容易使目标产物或固定化配基发生失活或不可逆变性，需慎重使用。第七章色谱（chromatography）：色谱又称层析，在英文中只有一个名词Chromatography。现在趋向于统一使用色谱这个名词，有些应用（蛋白质分离）仍习惯使用层析。分类：流动相与固定相：气相色谱法、液相色谱法、超临界流体色谱法固定相的形状：液相色谱：纸色谱、薄层色谱、柱色谱分配机理：凝胶过滤层析，离子交换层析，疏水性层析，反相层析，亲和层析…压力：低压（压力低于0.5MPa），中压（压力为0.5～4MPa），高压（压力4～40MPa）。蛋白质分离一般为中低压，介质相对较软