罗格列酮对糖尿病大鼠肺炎性病变的影响(精选).doc

罗格列酮对糖尿病大鼠肺炎性病变的影响 作者：吴晖　朱有法　陆颖理　庞玉萍　王国兴 赵江波 王舟 李红 【摘要】 目的　观察过氧化物酶体增殖体活化受体-r (PPAR-r)激动剂罗格列酮对链脲菌素诱导的糖尿病大鼠肺部炎性病变的影响。方法 30只10周龄SD大鼠随机分为正常对照组（C组，雌雄各5只）、糖尿病模型组（D组，雌雄各5只）、糖尿病罗格列酮处理组（DR组，雌雄各5只），采用链脲菌素诱导建立10周糖尿病大鼠模型。其中糖尿病罗格列酮处理组用马来酸罗格列酮1mg．kg-1．ｄ-1灌胃治疗，对照组及糖尿病模型组用同体积0.9％氯化钠注射液代替。模型建立10周后，全部大鼠于氯胺酮35mg/kg和苯巴比妥50mg/kg腹腔内注射麻醉处死，并取肺组织。光学显微镜下观察肺组织炎症程度、检测杯状细胞的分布，免疫组织化学方法检测肺组织TNF-α表达的阳性面积百分比与平均积分光密度值（IOD）。结果 ①肺部炎症观察：大多数正常对照组大鼠肺组织内未见炎症细胞。糖尿病模型组可见片状炎症细胞聚集，局部肺泡结构消失。罗格列酮处理组糖尿病大鼠肺组织炎症明显比模型组轻；②杯状细胞观察：在AB/PAS染色下，正常对照组大鼠各级气管上皮内均未见杯状细胞出现，糖尿病模型组在一级或二级支气管内出现较多的杯状细胞。罗格列酮处理组糖尿病大鼠在一级或二级支气管内也出现杯状细胞，但数量明显少于糖尿病模型组；③TNF-α的表达:TNF-α主要表达于气管、血管周围的成纤维细胞内，糖尿病模型组、罗格列酮处理组还可见巨噬细胞胞浆内阳性表达。正常对照组肺组织阳性表达较其余两组弱，罗格列酮处理组阳性面积百分比及平均积分光密度值介于正常对照组和糖尿病模型组之间[其中阳性面积百分比（%）C∶D∶DR组为9.07±4.17vs23.75±5.66vs12.21±1.50(F=54.5,P＜0.05；平均光密度C∶D∶DR组为0.60±0.03vs0.73±0.08vs0.66±0.04(F=22.73，P＜0.05）]，差异有统计学意义。结论 高血糖能引起肺部炎症及组织结构的破坏。罗格列酮能够保护糖尿病大鼠肺组织，该作用独立于降血糖之外。 【关键词】 糖尿病； 实验性；　肺；　炎症；　肿瘤坏死因子；　罗格列酮 1　材料和方法 1.1　实验动物及分组　2007年9月至12月选择10周龄Sprague-Dawley(SD)大鼠30只，雌雄各半；平均体重(313.97±33.77)g， 平均血糖(96.06±4.86) mg/L，由浙江省医学科学院动物中心提供。将大鼠分为正常对照组（C组，雌雄各5只）、糖尿病模型组（D组，雌雄各5只）、糖尿病罗格列酮处理组（DR组，雌雄各5只）。 1．2　模型的构建　所有大鼠在清洁性（二级）条件下饲养，室内温度为15℃～25℃，自由摄食及饮水[5]。糖尿病模型组腹腔注射链脲菌素（由美国Sigma公司生产）60mg/kg(溶于0.1mol/L pH4.5枸橼酸钠缓冲液)，血糖≥16.1mmol/L为造模成功。糖尿病罗格列酮处理组用马来酸罗格列酮（由天津葛兰素史克公司生产）1mg·kg-1·ｄ-1以0.9％氯化钠注射液溶解后灌胃。正常对照组及糖尿病模型组用同体积0.9％氯化钠注射液代替。 1．3　标本采集和处理　模型建立10周后，全部大鼠以氯胺酮35mg/kg和苯巴比妥50mg/kg腹腔内注射麻醉后，打开大鼠胸腔，右肺注入4％甲醛溶液3mL作内固定后摘下保存于4％甲醛溶液内48h，取材后经梯度乙醇脱水，石蜡包埋，切片5μm，行HE、AB/PAS及免疫组织化学染色。 1．4　检测指标 1．4．1　炎症程度检测　在HE染色切片上，阅读整张切片，根据炎症细胞的多少（主要观察淋巴细胞、中性粒细胞及嗜酸性粒细胞）进行定级。-: 肺间质无炎性细胞出现或散在少量炎症细胞；+: 肺间质有较多的炎性细胞浸润，在气管、血管周围可见炎症细胞呈小灶性聚集；+++: 炎性细胞密集，成片状分布，炎性细胞聚集处肺泡结构消失；++: 炎性细胞浸润程度介于+与+++之间。 1．4．2　杯状细胞检测　在AB/PAS(爱尔新蓝/过碘酸雪夫试剂)染色切片上，阅读整张切片，根据杯状细胞出现的部位及数量进行定级。-: 肺内各级支气管均无杯状细胞出现；+：在一级支气管上皮内出现杯状细胞，数量占支气管上皮的1％～10％； ++： 在二级支气管上皮内出现1％～10％或在一级支气管上皮内出现11％～50％的杯状细胞；+++：杯状细胞在细支气管出现或在二级支气管上皮内出现11％以上或在一级支气管上皮内出现51％以上。 1．4．3　TNF-α免疫组织化学染色　采用Envision二步法。一抗兔抗大鼠TNF-α多克隆抗体（由武汉博士德生物工程有限公司生产