陕北果树根际解磷菌的初步研究(精选).docVIP

陕北果树根际解磷菌的初步研究 摘要：试验利用ｐｋｏ培养基从陕北果树根际土壤中筛选得到４株可有效分解利用难溶性磷酸盐的菌株，对其解磷及促植物生长能力进行了研究。结果表明，试验菌株在利用无机磷的同时，可产生有机磷、ｎｈ３和ｈｃｎ，可有效促进植物的生长。试验可为陕北果树专用菌肥的开发、生产打下基础。 关键词：果树根际；解磷菌；代谢产物；陕北 ａｂｓｔｒａｃｔ： ｆｏｕｒ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｄｅｇｒａｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｏｆ ｆｒｕｉｔ ｔｒｅｅｓ ｉｎ ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｓｈａａｎｘｉ ｂｙ ｐｋｏ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｂｉｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． ｔｈｅｓｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｄｕｃｅ ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ， ｎｈ３ ａｎｄ ｈｃｎ， ａｎｄ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｐｌａｎｔｓ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ． ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｌａｉｄ ａ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌｍａｎｕｒｅ ｆｏｒ ｆｒｕｉｔ ｔｒｅｅｓ ｉｎ ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｓｈａａｎｘｉ． ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｏｆ ｆｒｕｉｔ ｔｒｅｅｓ； ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ－ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｓｔｒａｉｎｓ； ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ 磷素是植物生长的重要养分因子，但是由于施入土壤的大部分磷与土壤中的ｃａ２＋、ｆｅ２＋、ｆｅ３＋、ａｌ３＋等结合形成难溶性磷酸盐，成为生物低效磷［１］。研究表明，解磷微生物可以分泌有机酸，有机酸与土壤中的ｃａ２＋、ｆｅ２＋、ｆｅ３＋、ａｌ３＋等离子反应，从而使ｐｏ４３＋释放出来，有助于植物对磷素的吸收［２，３］。大部分解磷菌均属于根际微生物，由于受土壤物理结构、有机质含量、土壤类型、土壤肥力、耕作方式等因素的影响，在数量上存在较大差异。研究从陕北苹果树、枣树根际土壤中分离筛选高效解磷菌，并对其解磷及促植物生长能力进行研究，以期为陕北苹果树、枣树专用菌肥的研制生产打下基础。 １ 材料与方法 １．１ 材料 １．１．１ 供试土样 试验所用土样分别采自陕北洛川县苹果园和延川县枣园。 １．１．２ 试剂 ｆｅｓｏ４·７ｈ２ｏ（分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司）、ｈｇｃｌ２（分析纯，贵州省铜仁化学试剂厂）、ｋｉ（分析纯，天津天锋化学品有限公司）、氨基乙酸（甘氨酸，分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）、２，４，６—三硝基苯酚（分析纯，广州台山粤侨试剂有限公司）、ｎｅｓｓｌｅｒ’ｓ试剂［4］。 １．１．３ 仪器 ｕｖ－１２４０紫外可见分光光度计（日本岛津）、立式压力蒸汽灭菌锅（ｌｓ－ｂ５０ｌ，江阴滨江医疗设备厂）、隔水式电热恒温培养箱（ｐｙｘ－ｄｈｓ－４０×５０－ｂｓ，上海跃进医疗器械厂）、超净工作台（苏净集团安泰公司）、汽浴式振荡器（ｚｊｓ－１３２０，科大创新股份有限公司中佳分公司）等。 １．１．４ 培养基 ｐｋｏ培养基［5］、ｌｂ培养基、蛋白胨水培养基、ｎｂ培养基［6］。 １．２ 方法 １．２．１ 解磷菌的筛选 ①初筛。取土样进行高倍稀释，稀释液涂布于ｐｋｏ平板上，２８ ℃培养７ ｄ后，可在平板上产生透明圈的即为解磷菌，划线法分离得到单菌落，４ ℃保存备用。②复筛。复筛主要测定初筛得到菌株解磷能力的稳定性［7］。将初筛得到的解磷菌接种于ｌｂ固体培养基上，每２４ ｈ转接１次，连续转接２０次后，在ｐｋｏ平板上菌落周围仍可产生透明圈的为具有稳定解磷能力的解磷菌，将其作为下一步的试验菌株，４ ℃保存备用。 １．２．２ 试验菌株解磷能力的测定 ①解磷效果的定性测定。取复筛得到的试验菌株，接种于加溴甲酚紫的ｐｋｏ平板上，２８ ℃培养８ ｄ，测定解磷圈直径（ｄ）和菌落直径（ｄ），根据ｄ／ｄ的大小来确定其解磷能力。②解磷效果的定量测定［8－１1］。取定性测定的解磷能力较强的试验菌株，接种于ｌｂ液体培养基中，于２８ ℃、１８０ ｒ／ｍｉｎ活化２４ ｈ，取活化后的菌液以１０％的接种量接入ｐｋｏ培养基中，２８ ℃、１８０ ｒ／ｍｉｎ培养，每隔１ ｄ用磷钼蓝比色法［１2］测定培养液中有机磷的含量，连续测定，确定试验菌株对无机磷的分解情况。 １．２．３ 试验菌株代谢产物的定性测定［１3］ ①ｈｃｎ的测定。将试验菌株划线接种于添加了４．４ ｇ／ｍｌ甘氨酸的ｎｂ平板上，另将浸过２％碳酸钠、０．５％苦味酸溶液（２，４，６—三硝基苯酚）的滤纸置于培养