第四篇抗生素第4章.ppt.pptVIP

第四章 抗生素产生菌的代谢调节控制 第一节 抗生素产生菌的代谢调节 一、研究抗生素生物合成机制的常用方法 (一) 刺激试验法 (二) 同位素示踪法 (三) 洗涤菌丝悬浮法 (四) 无细胞抽提液法 (五) 遗传特性诱变法 二、初级代谢和次级代谢的关系 1、从菌体生化代谢看，抗生素的生物合成是由几种初级代谢产物形成的，即初级代谢途径提供合成抗生素的前体物质。如β—内酰胺类抗生素是由半胱氨酸和缬氨酸等氨基酸合成其母核的。 在代谢过程中，有些营养物质(如糖、蛋白质、脂类、核酸等)代谢的中间体既可以用来合成初级代谢产物．又可以生成次级代谢产物，这类中间体称做分叉中间体。 如EMP、HMP途径生成的乙酰辅酶A，羧化成丙二酰辅酶A，丙二酰辅酶A在初级代谢中经脂肪酸合成酶系合成脂肪酸，而在次级代谢中经重新环化或稠环，形成四环素、土霉素或其它抗生素，丙二酰辅酶A是一种分叉中间体。 从氨基酸合成肽类抗生素，并不是在合成一种蛋白质的核糖体中进行的，而是由特殊的复合体系来完成的，由于二种代谢途径纵横交错，在调节控制上也是相互影响的。 2、从遗传代谢的观点分析： 初级代谢和次级代谢都是受核内DNA控制，所不同的是次级代谢还受到与初级代谢产物合成无关的遗传物质的控制。许多抗生素的产生受核外质体遗传物质的控制，如灰色链霉素、红霉素产生菌等都含有与抗生素生物合成有关的质粒。研究抗生素合成时，既要考虑两者在核内外遗传物质的差异，又要考虑两者之间的相互作用。 三、抗生素产生菌的主要代谢调节作用 (一)诱导调节 甲硫氨酸促进头孢菌素C的合成，可以作为抗生素合成酶的诱导物。在抗生素分批发酵中，菌种生长期中未积累抗生素合成酶的诱导剂，基因处于被阻遏状态，在生长末期，由于代谢变化，积累或从外界加入诱导剂，解除了被阻遏状态，开始合成抗生素合成酶，进而合成抗生素，它可能就是发酵分期的原因之一。 (二) 碳分解产物的调节 分解产物阻遏和分解产物抑制，这两种类型在抗生素生物合成调节中都存在。在青霉素生产中，缓慢补加葡萄糖，可减少葡萄糖的作用，葡萄糖对放线菌素、嘌呤霉素的合成显示分解产物阻遏。其它碳源也有此作用，如柠檬酸盐阻遏新生霉素的合成；葡萄糖、果糖、乳糖、甘露糖、麦芽糖抑制卡那霉素的合成，以乳糖和果糖最为严重；葡萄糖抑制作用在头孢菌素、赤霉素、卡那霉素、杆菌肽等产品发酵中都有表现。 (三) 氮代谢产物调节 初级代谢与次级代谢中均存在氮分解代谢产物的阻遏作用，如谷氨酸和苯丙氨酸阻遏放线菌素合成中犬尿氨酸甲酰胺酶Ⅱ的形成，半胱氨酸和甲硫氨酸阻遏链霉素合成的甘露糖苷链霉素合成酶的形成，铵阻遏β-内酰胺抗生素合成的三肽合成酶(ACV)和脱乙酰氧头孢菌素C的形成。 (四) 磷酸盐调节 能强烈阻遏抗生素的合成，对四环素、氨基糖苷类、肽类和多烯类、大环内酯类等32种抗生素的合成产生阻抑。用量常被限制在 “亚适量”范围，接近耗尽时，抗生素才开始合成。如在链毒素合成中，最后的中间代谢产物是磷酸链霉素，过量存在可导致磷酸脂酶抑制，使磷酸链霉素在培养基内堆积，并抑制了链霉素的合成。 磷酸盐直接参与合成ATP，细胞内ATP含量高低，直接影响抗生素的合成。有人发现高产菌株的ATP水平比低产菌株低，高浓度ATP可能改变糖的代谢途径，影响抗生素合成。 (五)反馈调节 抗生素本身的积累能起反馈调节作用，加青霉素、氯霉素等本身就有限制抗生素产生的作用；另一方面，初级代谢产物往往是次级代谢的前体，初级代谢形成受到反馈调节，必然影响抗生素的合成。初级代谢和次级代谢的分叉中间体，受到反馈调节的作用后，既影响初级代谢产物生成，又影响次级代谢产物合成，如青霉素生物合成中赖氨酸反馈抑制。 (六)细胞膜透性的调节 产生新霉素的弗氏链霉菌和不产新霉素的变异株的细胞膜的脂肪酸组成不一样，但在培养基中加入油酸钠或NaCl，变异株膜脂肪酸组成发生改变，恢复成母株的组成并产生新霉素。推测细胞膜的脂肪酸组成似乎是细胞摄取合成新霉素所需氨基酸(主要是谷氨酸)的控制因素。 又如利用突变方法获得的青霉素高产菌株中，就是提高了细胞膜摄取无机硫酸盐的能力，即提高了膜内硫酸盐的浓度，从而有效地将无机硫转变为半胱氨酸，增多了合成青霉素前体物质。 第二节 生长期和生产期的相互关系 抗生素发酵中存在着明显不同的阶段，即生长期和生产期。不少抗生素只在生产期产生，如